AZD9291奥希替尼对EGFR TKI和化学治疗药物敏感性的表征

　　通过将奥希替尼（AZD9291）剂量从0.03μM逐步增加到1.5μM约6个月，从NCI-H1975细胞建立NCI-H1975 / OSIR细胞。通过3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2，5-二苯基四唑溴化物（MTT）分析研究了奥希替尼处理后NCI-H1975和NCI-H1975 / OSIR细胞的细胞活力。暴露于OSI 72h后，NCI-H1975 / 奥希替尼细胞的细胞活力没有像NCI-H1975细胞那样显着降低。NCI-H1975和NCI-H1975 / 奥希替尼电池的奥希替尼IC50值分别为0.03μM和4.77μM。为了进一步证实NCI-H1975 /奥希替尼细胞对奥希替尼的抗性，检测了用奥希替尼处理后的NCI-H1975和NCI-H1975 / 奥希替尼细胞的集落形成能力。用0.03μM和0.5μMOSI处理NCI-H1975细胞可减少细胞集落形成。即使在浓度为0.5μMOSI的情况下，用奥希替尼处理后NCI-H1975 / OSIR细胞的集落形成也没有减少。

　　长期暴露于奥希替尼后，在NCI-H1975细胞中观察到细胞形态，增殖，迁移和侵袭的巨大变化。与NCI-H1975细胞相比，NCI-H1975 / OSIR细胞具有更大的细胞大小和更像成纤维细胞的细胞形状。通过MTT测定研究了从第1天到第7天未经处理的NCI-H1975和NCI-H975 / OSIR细胞的细胞增殖能力。NCI-H1975 / 奥希替尼细胞的生长速度比NCI-H1975细胞慢，从第1天到第7天，NCI-H1975细胞和143.36的增殖率分别为149.41％，249.36％，308.20％，369.6％，466.46％和634.87％。 NCI-H1975 / 奥希替尼细胞从第1天到第7天分别为％，193.02％，238.44％，267.99％，353.82％和456.70％。NCI-H1975细胞获得了对OSI的抗性后，PCNA的蛋白表达（对细胞复制至关重要）下降了。

　　使用transwell测定法评估了每个细胞系对细胞转移至关重要的细胞迁移（无基质胶）和侵袭（有基质胶）能力。无论NCI-H1975 / OSIR细胞是否经过基质胶预处理，其通过穿孔插入物上膜的NCI-H1975 / OSIR细胞要多于NCI-H1975 / OSIR细胞。考虑到FAK，Src和Paxillin的活化对于细胞转移至关重要，因此进行了蛋白质印迹分析，结果表明NCI-H1975 / OSIR细胞中FAK，Src和Paxillin的活化高于NCI。 -H1975细胞。此外，MMP2表达的增加和TIMP2蛋白表达的减少与细胞转移密切相关。NCI-H1975细胞相比，NCI-H1975/OSIR细胞中MMP2表达较高，而TIMP2表达较低。上述结果表明，与NCI-H1975细胞相比，NCI-H1975 / 奥希替尼细胞显示出较慢的细胞增殖速率，同时具有较高的细胞迁移和侵袭能力。

　　EGFR TKIs耐药性出现后的治疗策略一直是一个有争议的问题。在抗药性上是否可以使用其他EGFR TKIs的决定尚不清楚。在本研究中，采用FDA批准的EGFR TKI（第一代EGFR TKI吉非替尼和厄洛替尼以及第二代EGFR TKI阿法替尼）来研究NCI-H1975和NCI-H1975 / 奥希替尼细胞的抗增殖作用。NCI-H1975 / OSIR细胞比NCI-H1975细胞对EGFR TKI耐受性更高，吉非替尼，厄洛替尼和阿法替尼的耐药指数分别为1.784、5.143和13.239。此外，还研究了第三代EGFR TKI rociletinib，该药物目前正在临床试验中。rociletinib在NCI-H1975 / 奥希替尼细胞中的最大半数抑制浓度（IC50）（7.707μM）高于NCI-H1975 / OSIR细胞中的最大抑制浓度。

　　化学疗法也是治疗EGFR TKIs耐药患者的药物选择。检测到化学治疗剂在NCI-H1975和NCI-H1975 / OSIR细胞中的抗增殖作用。BNCI-H1975 / OSIR细胞比NCI-H1975细胞对紫杉醇更敏感。尽管细胞对奥希替尼的耐药性显示对培美曲塞的耐药性较弱，但培美曲塞在NCI-H1975 / OSIR细胞中的抗增殖作用仍然很弱。

与NCI-H1975细胞相比，NCI-H1975 / OSIR细胞对阿霉素和氟尿嘧啶（IC50，NCI中为43.910μM -H1975细胞和NCI-H1975 / 奥希替尼细胞中的100μM以上。此外，通过RT-PCR测定法检测多种抗药性（MDR）基因的mRNA表达，例如MRP1，MRP7，ABCG2，LRP，ABCE1和ABCF1。结果表明NCI-H1975和NCI-H1975 / OSIR细胞中MDR基因的mRNA水平相似。此外，两种细胞系中P-gp的蛋白质表达均未表达。奥希替尼仿制药的价格也是非常实惠，需要购买可以添加下方微信。