耐奥希替尼/泰瑞沙的PC9细胞的全基因组测序

　　为了确定奥希替尼（泰瑞沙）耐药的潜在机制，对从PC9亲本PC9 / T790M，PC9 / T790M / AZDR和H1975亲本H1975 / AZDR细胞分离的DNA进行了全外显子测序。在PC9 / T790M / AZDR和H1975 / AZDR细胞中观察到了在PC9亲本，PC9 / T790M和H1975亲本中未观察到的几个遗传突变。但是，与第三代EGFR-TKI抗药性潜在相关的遗传改变，例如获得EGFRC797S或L798I突变，丧失T790M突变，扩增野生型EGFR或MET或突变的KRAS，MEK，BRAF，在PC9 / T790M / AZDR和H1975 / AZDR细胞中未检测到PIK3CA。在EGFRE746-A750 +德尔T790M突变在PC9 / T790M / AZDR细胞保存。该EGFRL858R + T790M突变也被保存在H1975 / AZDR细胞。

　　PC9 / T790M / AZDR细胞中IGF1R的激活和IGFBP3表达的丧失

　　旁路信号通路的激活有助于获得对EGFR-TKI的抗性。我们使用人磷酸RTK阵列试剂盒分析了耐奥美替尼的PC9细胞中多种受体酪氨酸激酶（RTK）的磷酸化水平。该磷酸化RTK阵列试剂盒旨在同时检测49种不同RTK的相对磷酸化，如补充材料和方法中所述。在a，b中，IGF1R在PC9 / T790M / AZDR细胞中被显着激活，而在PC9亲本和PC9 / T790M细胞中未发现。在PC9 / T790M / AZDR细胞中未检测到其他报道的旁路途径的任何激活，如HER2，MET和AXL信号传导，导致对EGFR-TKI的抗性。在H1975 / AZDR细胞中也观察到了IGF1R激活。

　　PC9 / T790M / AZDR细胞中IGF1R的激活和IGFBP3表达的丧失。PC9亲本，PC9 / T790M和PC9 / T790M / AZDR细胞的细胞裂解液用于磷酸受体酪氨酸激酶阵列柱状图显示了磷酸化IGF1R表达的倍数变化。通过设置PC9 / T790M和PC9 / T790M / AZDR细胞的磷酸化-IGF1R蛋白斑点信号强度与PC9亲代细胞的磷酸化-IGF1R蛋白斑点信号强度的比率来计算倍数变化。蛋白质印迹分析，用于检测总的和磷酸化的IGF1R，IGFBP3和肌动蛋白。使用ImageQuant TL对每个条带进行光密度分析。条形图显示了磷-/IGF1R总蛋白和IGFBP3 / Actin蛋白条带强度。结果代表两个独立的实验。

　　先前的报道表明，胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP3）表达的下调与导致EGFR-TKI抵抗的IGF1R途径的激活有关。为了研究PC9 / T790M / AZDR细胞中IGF1R激活的机制，我们通过蛋白质印迹分析了IGFBP3的表达。与RTK阵列的发现一致，与PC9 / T790M细胞相比，PC9 / T790M / AZDR细胞中的IGF1R磷酸化。此外，PC9 / T790M / AZDR细胞中IGFBP3的表达下调。奥希替尼现在的效果还是非常的不错，如果您有需要购买仿制药版本的奥希替尼可咨询下方微信。