乐伐替尼/乐卫玛耐药细胞系相关分析

　　为了模拟乐伐替尼（乐卫玛）的耐药性，我们在含有25 μM 乐伐替尼的培养基中培养了8505C细胞系72天。对8505C耐乐伐替尼耐药（8505C Res）细胞系进行形态学分析后发现其从上皮表型变为间充质表型更重要的是，在治疗期结束时，我们测试了细胞的凋亡诱导作用。与用25 μM 乐伐替尼处理后显示凋亡的亲代8505C细胞相比，在相同剂量的乐伐替尼下，8505C Res细胞的凋亡诱导较少。

　　我们使用RT-PCR进一步表征了亲本与耐药细胞系中不同标志物的mRNA表达。从结果可以看出，与亲本细胞系相比，抗性细胞显示包括Mcl-1和Bcl-2在内的存活前标记物的表达显着增加，并且凋亡前标记物Bax降低。此外，我们还观察到PI3K，AKT和mTOR表达的增强以及下游分子（如Rho GTPase效应子p21活化激酶（PAK），尤其是PAK1和PAK4）的激活。有趣的是，发现核输出蛋白XPO1（也称为染色体区域维持蛋白1（CRM1））在耐乐伐替尼的细胞中被激活。

　　耐乐伐替尼的甲状腺癌细胞系的发展。将8505C人甲状腺癌（未分化）细胞系在含有乐伐替尼的培养基中培养72天。每周两次将细胞传代，并将药物连续添加到培养基中。显微照片（放大10倍）显示在乐伐替尼暴露的细胞中出现间充质形态。将所得的耐乐伐替尼抗性细胞系8505C Res和亲本8505C以每孔50,000个细胞的密度接种在6孔板中。24小时后，将细胞暴露于对照（DMSO）或乐伐替尼（25μM）72小时。膜联蛋白V FITC凋亡的分析是根据制造商的方案进行的。RT-PCR分析与凋亡信号，PI3K信号和EGF相关的标志物表达的变化。将表达值标准化为肌动蛋白或GAPDH。*p<0.05；**p<0.01

　　鉴于上皮到间质转化是干样细胞的固有特性，我们接下来评估了间充质耐药细胞中EMT和干细胞标志物的表达。耐药细胞显示间充质标记物Snail（p<0.05）和波形蛋白（p<0.01）的RNA水平显着增加。还观察到经典干细胞标志物ALDH的RNA水平在耐药细胞中升高。

　　然而，当检查这些间充质和干性标记物的蛋白质表达时，与亲代8505C细胞相比，仅发现的表达显着升高（增加了3.5倍）。波形蛋白表达仅略有增加，而Snail和ALDH2表达却低于亲代细胞系。由于上述标记的RNA和蛋白质表达分析的结果并不完全一致，因此无法确切地确定抗性细胞中EMT的出现和干性。乐伐替尼的相关分析就到这里了，如果您有需要购买，可以添加下方微信。