奥希替尼/泰瑞沙抗人HER2的功效

　　用奥希替尼（泰瑞沙）或第一代TKI厄洛替尼处理Ba/F3-hHER2wt细胞6小时显示，尽管厄洛替尼在高达500nmol/L的浓度下均不抑制HER2磷酸化（pHER2），但奥希替尼显示出有效的剂量依赖性活性从浓度为100nmol/L的方法证实，奥希替尼确实靶向人野生型HER2。 我们用奥希替尼或厄洛替尼进一步处理Ba/F3-hHER2wt细胞72小时以计算生长抑制（GI50），发现与厄洛替尼（438nmol/L）相比，奥希替尼的GI50。综上所述，这些结果证实了奥希替尼抗人HER2的功效，并在体外低剂量时有效抑制了pHER2。

　　之前已经描述了生成tet-op-hHER2小鼠队列的过程。简而言之，将由四个重复的四环素操纵子，野生型人HER2基因和SV40 poly（A）组成的转基因DNA构建体注入FVB/N胚泡中。靶向转基因的PCR用于筛选阳性后代。将Tet-op-hHER2小鼠与Clara细胞分泌蛋白（CCSP）-rtTA小鼠杂交，以获得tet-op-hHER2 / CCSP-rtTA（HW）集落。从至少6周龄开始向HW菌落饲喂连续的强力霉素（doxy）饮食。

　　所有小鼠的繁殖和治疗实验均在Dana-Farber癌症研究所动物护理和使用委员会的批准下进行。 通过标准细胞遗传学方法直接制备（无培养或刺激），将HW小鼠的外周血样品制备用于荧光原位杂交（FISH），并制备了带有核的风干载玻片，并根据提供的说明进行杂交商业探针。使用商业化的人HER2基因组探针作为内部对照，使用定制的双色FISH探针评估血液样本中人HER2的存在和拷贝数。 D15Mit224的商用鼠标探针，D15Mit224是15号染色体上的单拷贝区域。

　　对100个核进行了评分-两名观察员分别对50个细胞进行了评分。所有可评分核均具有至少一个橙色和一个绿色信号；绿色（内部对照）探针在100个细胞中的92个细胞中给出了预期的两个信号模式，反映了出色的杂交效率。 以前的数据显示，通过细胞系测定，奥希替尼对野生型HER2具有体外功效。为了证实这种体外功效并测试奥西替尼是否可以靶向HER2wt，我们在Ba / F3细胞中过表达了野生型人HER2。

　　为了研究奥希替尼对hHER2的体内作用，我们首先通过向FVB/N胚泡中注射一个包含四环素操纵基因序列的七个直接重复序列的4.75kb DNA片段，生成了一个tetO-hHER2转基因小鼠奠基人，然后是野生型人类HER2开放阅读框（ORF）和SV40 polyA。 tetO-HER2小鼠创始人与CCSP-rtTA小鼠一起繁殖，以产生可诱导的肺特异性双转基因hHER2wt/CCSP-rtTA（HW）队列，该队列同时包含激活物和响应者转基因。为了确认hHER2wt已整合到小鼠基因组中，我们使用从HW小鼠收集的血液样本进行了FISH。 FISH分析表明，在人类小鼠基因组中有两个人HER2拷贝。

　　实时定量PCR检测还使用小鼠TERT基因作为对照确认了hHER2的两个拷贝。我们进一步旨在通过强力诱导在蛋白水平上检查hHER2表达。 doxy诱导的HW小鼠的肺在被doxy诱导5周后表现出hHER2表达，而pHER2随时间增加。为了验证HER2的表达是否依赖于doxy，将doxy食品改为正常饮食3天。

　　除去三天的强氧化剂后，几乎无法检测到hHER2的表达，这证实了hHER2的表达是强依赖的。 为了验证hHER2表达是否可以引发肺癌的发展，给HW小鼠喂食了连续的高氧饮食，并通过肺MRI进行监测。肿瘤在6周后开始形成，并在16周后发展为高度肿瘤。硬件肿瘤的IHC显示出高水平的HER2和pHER2。我们还检查了标记物，发现这些HW肿瘤显示出具有TTF1阳性染色和SOX2和p63低表达的腺癌特征。这些组织学特征表明，HW模型模仿了临床环境，因为大多数具有HER2异常的肺癌确实是腺癌。

　　阐明hHER2可以驱动肺腺癌的新生肿瘤发生后，我们进一步探讨了HER2是否也需要用于维持肿瘤。形成肿瘤后，用普通食物代替高糖饮食，除去高糖饮食后2周。这证实了HER2是肺癌的致癌驱动因子，并且是维持肿瘤所需的。连续MRI监测显示，诱导后10周肿瘤发展更快，而强力诱导后小鼠的中位生存期为19.4周。现在奥希替尼仿制药的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。