目的:
批准的第三代EGFR抑制剂奥希替尼(9291)(osimertinib或TAGRISSO™)在EGFR突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中抗肿瘤活性的机制尚不清楚,特别是对后续获得性耐药的发展,因此是本研究的重点。
实验设计:
将敏感细胞系暴露于奥希替尼(9291),建立azd9219耐药细胞系。Westernblotting检测蛋白改变。annexinV/流式细胞仪检测细胞凋亡。体外用细胞数估计和菌落形成实验评价药物的生长抑制作用,体内用xenogtaft模型评价药物的生长抑制作用。通过比较蛋白质的半衰期和抑制蛋白酶体来测定蛋白质的降解。通过siRNA或shRNA实现基因敲除。
结果:
奥希替尼(9291)可有效诱导egfr突变的NSCLC细胞系凋亡,ERK磷酸化被抑制,同时Bim升高,mcll-1降低,可能是由于mcll-1降解增强,Bim稳定性增强。通过基因敲除阻断Bim的升高或增强mcl1的表达,可减轻或消除奥希替尼(9291)诱导的细胞凋亡。此外,奥希替尼(9291)失去了调节奥希替尼(9291)耐药细胞系Bim和mcl1水平的能力。MEK抑制剂与奥希替尼(9291)的结合可以恢复奥希替尼(9291)耐药细胞(包括C797S突变的细胞)在体外和体内发生凋亡和生长衰退的敏感性。
结论:
调节MEK/erk依赖性的Bim和mcl1降解关键介导了egfr突变的NSCLC细胞对奥希替尼(9291)的敏感性和抗性,是克服获得性奥希替尼(9291)抗性的有效策略。
奥希替尼(9291)(osimertinib或TAGRISSO™)、CO1686(rociletinib)、HM61713(Olmutinib)、EGF816(Nazartinib)、ASP8273、PF06747775和AC0010(Avitinib)代表第3代EGFR-tkis,它们通过常见的激活突变Del19和L858R以及耐药T790M选择性和不逆转抑制EGFR,同时保留野生型EGFR。奥希替尼(9291)在第1代和第2代EGFR-tkis疾病进展后出现EGFRT790M突变的NSCLC患者中非常活跃,目前已被fda批准用于治疗T790M突变的NSCLC患者。除了T790MEGFR靶向非小细胞肺癌外,检测第三代EGFR-tkis(如奥希替尼(9291))对初治、局部晚期或转移性EGFR突变型非小细胞肺癌疗效的临床试验正在进行。
不幸的是,对第三代EGFR-TKIs获得性耐药的发展已经在临床中被描述。最近报道了一种新的获得性EGFRC797S突变,在体外培养的细胞系和奥希替尼(9291)耐药的临床肿瘤中被证实。然而,这种突变只在奥希替尼(9291)治疗的T790M突变的NSCLCs中检测到(33-36%),在CO1686耐药的病例中非常罕见(<3%)。此外,最近我们等证实了MET扩增是抗奥希替尼(9291)和CO1686的另一种机制。因此,似乎存在介导对第三代EGFR-TKIs耐药的异质性机制。
虽然第3代EGFR-tkis治疗EGFRT790MNSCLC的成功已经明确,但除了与EGFR突变体结合和抑制EGFR信号通路外,这些新型EGFR-tkis发挥抗癌作用的确切机制仍不清楚。因此,我们致力于全面了解第三代EGFR-TKIs的抗癌生物学原理,以便为合理开发有效策略提供依据,以预防和/或克服对这些药物的获得性耐药。
在本研究中,我们证明了对erk依赖性Bim和mcl1降解的调节是介导奥希替尼(9291)靶向治疗具有EGFR激活突变的NSCLC疗效的关键事件。因此,我们提出了通过调节这些事件来克服奥希替尼(9291)抗性的有效策略。详情请扫码咨询:
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