奥希替尼/泰瑞沙具有高度的选择性

　　阿斯利康开发了一系列不可逆的小分子抑制剂，用于靶向EGFR酪氨酸激酶的致敏和T790M耐药突变体，选择性地取代受体的野生型。这些化合物通过形成共价键以ATP结合位点的半胱氨酸-797残基为靶点，不可逆地与EGFR激酶结合。对这一化学类型的进一步研究可以发现额外的结构活性关系(SAR)，这使得靶点的效价能够在不增加亲脂性的情况下增加，从而保持良好的类药物性质。持续的药物化学努力取得了进一步的改进，包括提高了激酶的选择性，最终得到了单苯胺嘧啶奥希替尼。经胰凝乳蛋白酶消化谱的质谱分析证实，奥希替尼可以共价修饰重组EGFR(L858R/T790M)的靶点半胱氨酸797氨基酸。

　　奥希替尼具有与第三代TKIsWZ4002(34)和CO-1686(35)不同的化学结构。而前两种化合物有许多共同的结构特点(如亲电功能的定位与守恒的半胱氨酸残基发生反应存在于表皮生长因子受体(半胱氨酸797)，heteroatom-linked嘧啶4-substituents，和一个嘧啶5-substituent)，奥希替尼架构上是独一无二的。除其他不同之处外，亲电功能位于嘧啶C-2取代环上，嘧啶4取代基为c-链杂环，嘧啶5位无取代。　　

　　在EGFR重组酶检测(Millipore)中，奥希替尼对L858R和L858R/T790M的IC50分别为12nM和1nM；由于活性酶的数量随时间的变化而变化，因此不可逆剂的IC50是随时间变化的，所以称为表观酶。该药物对L858R/T790M的药效是野生型EGFR的近200倍，这与与早期代TKIs相比突变型EGFR选择性剂的设计目标一致。随后的小鼠体内研究表明，奥希替尼代谢产生至少两种循环代谢物，AZ5104和AZ7550。在生化分析中，AZ7550与亲本具有相当的效力和选择性。相比之下，尽管AZ5104表现出了相同的总体特征，但它对突变型和野生型EGFR更有效，因此与亲本相比具有更小的选择性裕度。　　

　　为了探索更广泛的激酶组选择性，我们对奥希替尼和代谢物进行了1M的测试，测试了商业生化激酶组(Millipore)上大约280种其他激酶。奥希替尼表现出最小的脱靶激酶活性，只有有限数量的其他激酶表现出大于60%的抑制作用，如ErbB2/4、ACK1、ALK、BLK、BRK、MLK1和MNK2。活性代谢物显示出与亲本相似的二级靶标。鉴于奥希替尼与Cys797在EGFR中形成共价键，我们特别有兴趣探索在类似激酶区域有半胱氨酸残基的其他激酶的效力。在与EGFR类似的Cys797存在于人类kinome中的其他9个激酶中，奥希替尼仅在针对ErbB2、ErbB4和BLK的生化检测中显示出显著的活性(补充表S1B)，这表明奥希替尼具有高度的选择性。　　

　　与T790M双突变型EGFR受体一样，胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)和胰岛素受体(IR)在其激酶区域也有蛋氨酸看门人。我们认为重要的是发展对这些激酶的选择性，以减少潜在的剂量限制毒性与高血糖有关。使用商品化细胞IGF-1R磷酸化检测作为替代，奥希替尼和代谢物AZ5104对该受体家族没有显着活性。此外，小鼠单次口服200mg/kg的奥希替尼在24小时内并没有引起血糖或胰岛素水平的显著变化，这与IGF-1R缺乏活性是一致的(数据未显示)。　　

　　最后，我们通过三种不同的细胞方法来评估HER2(ErbB2)的细胞效力:在HEK293细胞和PC-9细胞(ex19del)中检测野生型HER2的表达HEK293细胞的生化重构研究，涉及编码L858R/T790M、野生型EGFR或野生型HER2的胞内结构域构建。奥希替尼在细胞中抑制HER2磷酸化水平的作用一直是中等。然而，AZ5104的代谢物显示出比奥希替尼(泰瑞沙)更强的抗phospho-HER2的作用，这与其更强的EGFR野生型效力一致。详情请扫码咨询：