奥希替尼9291通过FOXA1上调IGF-1R mRNA表达

　　我们研究了奥希替尼（9291）暴露后IGF-1R蛋白增加的机制。定量RT-PCR显示奥希替尼（9291）暴露上调了IGF-1R mRNA的表达(Supplementary Fig. 7a)。在奥希替尼（9291）暴露后，环己酰亚胺在mRNA和蛋白水平上都抑制了IGF-1R的诱导。因此，我们推测奥希替尼（9291）上调IGF-1R可能需要转录因子从头合成蛋白来激活IGF-1R mRNA的表达。　　

　　为了识别这些候选转录因子，我们试图发现能够结合IGF-1R启动子周围的调控区域的转录因子，这些转录因子在奥希替尼（9291）暴露后被上调。从ChIP-Atlas13整合的公开的ChIP-seq数据中，我们选择了79个候选转录因子，它们可以结合到IGF-1R转录起始位点(TSS)附近的DNase I超敏位点1 (DHS1)上(Supplementary Fig. 8a)。然后，我们进行定量RT-PCR分析，以确定奥希替尼（9291）暴露上调的候选转录因子。四个转录因子包括BCL6 CEBPA FOXA1,和NFE2上调逾两个在HCC827 奥希替尼（9291）治疗后细胞。　　

　　探讨这四个候选人参与IGF-1R mRNA upregulation,我们检查了BCL6的影响,CEBPA, FOXA1 NFE2击倒,每个shRNA 奥希替尼（9291） HCC827治疗细胞。FOXA1的下调抑制了奥希替尼（9291）诱导的IGF-1R mRNA的上调，而非NFE2、BCL6或CEBPA的下调。我们用三种不同的shRNAs证实了FOXA1敲低对IGF-1R mRNA诱导的抑制作用。　　

　　此外，FOXA1敲低抑制了奥希替尼（9291）诱导的总IGF-1R和磷酸化IGF-1R蛋白的上调，但没有影响总EGFR和磷酸化EGFR蛋白的状态。这些结果表明FOXA1在奥希替尼（9291）诱导的HCC827细胞IGF-1R上调中是不可或缺的。接下来，我们研究了FOXA1过表达对奥希替尼（9291）处理细胞的影响。HCC827细胞,过度FOXA1 IGF-1R信使rna的含量增加,总IGF-1R,和蛋白质磷酸化IGF-1R 奥希替尼（9291）的存在与否,但没有影响总表皮生长因子受体和磷酸化EGFR蛋白。这些结果显示的特定角色FOXA1 IGF-1R的转录激活。　　

　　接下来，我们研究了FOXA1沉默或过表达对HCC827细胞中奥希替尼（9291）耐受性的影响。通过使用三种不同的shRNAs敲除FOXA1, 奥希替尼（9291）耐受菌落的数量减少，而FOXA1过表达则增加。这些结果表明FOXA1有助于增强HCC827细胞对奥希替尼（9291）的耐受性。环hex酰亚胺对奥希替尼（9291）暴露后FOXA1的诱导没有影响，这表明奥希替尼（9291）上调FOXA1不需要重新合成蛋白。我们推测奥希替尼（9291）诱导FOXA1 mRNA的原因可能是预先存在的信号蛋白或通路。因此，我们观察到，在IGF-1R敲除的HCC827细胞克隆中，奥希替尼（9291）依赖的FOXA1诱导被显著抑制。这些结果表明，在奥希替尼（9291）暴露后，IGF-1R蛋白参与了激活FOXA1 mRNA表达的信号转导。　　

　　由于在DHS1中IGF-1R基因的TSS附近有一个一致的FOXA1结合位点，我们进行了ChIP实验来检测奥希替尼（9291）治疗是否诱导了IGF-1R基因表观遗传学状态的改变。Osimertinib治疗可诱导转录活性组蛋白修饰，如H3K4me3和H3K27Ac，这些修饰位于DHS1区域(Pro1和Pro2)内，但不位于Pro0区域外。总的来说，这些数据表明奥希替尼（9291）暴露通过内源性IGF-1R蛋白的信号通路激活了FOXA1的表达。然后FOXA1诱导IGF-1R基因转录更加活跃的表观遗传学状态，导致HCC827细胞中IGF-1R的正反馈激活。详情请扫码咨询：