在第一组实验中,我们比较了易感性奥希替尼(AZD9291)AXL-high-expressing(中冲,中冲/GXRHCC4011)和AXL-low——表达(HCC4006、HCC827H3255)EGFR-mutated非小细胞肺癌细胞株体外。而奥希替尼(AZD9291)抑制的可行性EGFR-mutated非小细胞肺癌细胞株进行剂量依赖性的方式,axl低表达的肿瘤细胞株的IC50(半最大抑制浓度)值低于axl高表达的肿瘤细胞株。
在我们之前的研究中,这些结果表明,与axl高表达egfr突变的NSCLC细胞相比,axl低表达egfr突变的NSCLC细胞对奥希替尼(AZD9291)更敏感。然而,无论AXL表达如何,少量肿瘤细胞在1mol/L奥希替尼(AZD9291)暴露72小时后仍存活,表明这些细胞具有奥希替尼(AZD9291)耐受性。
接下来,我们回顾性评估了29例egfr突变的非小细胞肺癌患者AXL表达与作为一线治疗的奥希替尼(AZD9291)临床疗效之间的相关性。表达妳的细胞细胞质pre-EGFR-TKI-treated肿瘤样本评估使用免疫组织化学(包含IHC)染色和得分非常高(3+),高(2+)、低(1+)和(0)表达妳的。29EGFR-mutatedNSCLC肿瘤标本,高(2+3+)和低(1+不)妳表达式在6(21%),23例(79%)标本,分别。axl-低表达患者对奥希替尼(AZD9291)的应答率(16/23;高于axl高表达组(3/6;特别是在AXL评分为3+的患者中,对奥希替尼(AZD9291)治疗的应答者为零(0/2;0%)。
此外,与axl高表达相比,奥希替尼(AZD9291)在axl低表达患者中引起肿瘤收缩的趋势更明显(p=0.094)。值得注意的是,在这29名患者中,无论肿瘤中AXL的表达如何,奥希替尼(AZD9291)治疗均未达到完全缓解,这表明即使在有反应的患者中,小肿瘤仍是残留病灶。这些结果表明,细胞系实验结果表明,虽然axl低表达egfr突变的nsclc对奥希替尼(AZD9291)高度敏感,但往往在获得耐药后产生耐药性。
为了阐明奥希替尼(AZD9291)耐受的机制,我们进行了受体酪氨酸激酶(RTK)阵列分析,比较了使用或不使用奥希替尼(AZD9291)处理72小时后axl低表达(HCC4006和H3255)和axl高表达(PC-9)egfr突变的NSCLC细胞系。在49个RTKs中,奥希替尼(AZD9291)在axl低表达的肿瘤细胞株中表达后IGF-1R磷酸化升高,而在axl高表达的肿瘤细胞株中则没有升高。Westernblot分析显示,尽管评估的egfr突变的NSCLC细胞系表达不同水平的IGF-1R蛋白,但与axl高表达的肿瘤细胞系相比,axl低表达的肿瘤细胞报告的磷酸化IGF-1R(pIGF-1R)水平更高。
与RTK阵列结果一致,奥希替尼(AZD9291)暴露72小时增强了axl低表达肿瘤细胞株(HCC4006、HCC827和H3255)的pIGF-1R。有趣的是,虽然在最初3-24小时内IGF-1R磷酸化被抑制,但与对照组相比,在奥希替尼(AZD9291)暴露后72小时,IGF-1R蛋白表达及IGF-1R磷酸化水平均有所升高。流式细胞术分析证实,奥希替尼(AZD9291)处理的HCC4006细胞中IGF-1R蛋白表达增加,但PC-9细胞中没有。在H3255细胞和HCC4006细胞中的FGFR3中,在RTK阵列中奥希替尼(AZD9291)似乎增加了MET的磷酸化。
然而,在westernblotting中,我们分别检测到奥希替尼(AZD9291)处理H3255和HCC4006细胞72小时后,磷酸化的MET和FGFR3没有明显增加。我们进一步评估了MET抑制剂(crizotinib)和FGFR抑制剂(BGJ398)对H3255细胞和HCC4006细胞奥希替尼(AZD9291)敏感性的影响。尽管crizotinib和BGJ398分别抑制H3255和HCC4006细胞中MET和FGFR3的磷酸化,但crizotinib和BGJ398均未显著影响H3255和HCC4006细胞的奥希替尼(AZD9291)敏感性。这些结果表明,至少在我们的实验条件下,MET和FGFR3不太可能在介导egfr突变的肺癌细胞的奥希替尼(AZD9291)敏感性方面发挥主要作用。
接下来,我们评估了16例AXL-low(no-1+)表达egfr突变的非小细胞肺癌患者,作为一线治疗的奥希替尼(AZD9291)与pIGF-1R表达的相关性。在egfr-tki治疗前的肿瘤样本中,我们使用免疫组化染色来评估pIGF-1R的表达,并将其分为veryhigh(3+)、high(2+)、low(1+)和no(0)表达。16例标本中,5例(31%)和11例(69%)的pIGF-1R表达高(2+至3+)和低(no至1+)。
高表达pigf-1r的患者对奥希替尼(AZD9291)的反应率为100%(5/5);而在pigf-1r低表达的患者中,应答率为73%。此外,奥希替尼(AZD9291)-induced肿瘤收缩患者更明显pIGF-1R-high表达式与pIGF-1R-low相比表达式(p=0.011),符合实验结果使用EGFR-mutated执行非小细胞肺癌细胞系。这些结果表明,在水平的磷酸化IGF-1R奥希替尼(AZD9291)与更好的响应,与奥希替尼(AZD9291)介导的IGF-1R蛋白表达增加相关的IGF-1R磷酸化的进一步增加可能在观察到的axl低表达egfr突变的NSCLCs耐受性中发挥关键作用。详情请扫码咨询:
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