奥希替尼9291也能有效抑制T790M突变株

　　我们比较了奥希替尼（9291）和其他早期代EGFRTKIs在EGFR磷酸化和细胞死亡(Sytox)检测中的作用，使用了许多含有野生型或不同形式突变EGFR的肿瘤细胞系。与第一代EGFR抑制剂(吉非替尼和埃洛替尼)和第二代EGFR抑制剂(阿法替尼和达索米替尼)相比，奥希替尼（9291）表现出独特的第三代TKI特征。在EGFR致敏突变体包括PC-9(ex19del)、H3255(L858R)和H1650(ex19del)在内的EGFR细胞中，奥希替尼（9291）在抑制EGFR磷酸化方面表现出与早期代TKIs相似的效力，奥希替尼（9291）的IC50平均值在13~54nM之间。　　

　　奥希替尼（9291）也能有效抑制T790M突变株(H1975(L858R/T790M)、PC-9VanR(ex19del/T790M)的EGFR磷酸化，平均IC50效度小于15nM。第一代可逆TKIs对T790MEGFR的磷酸化抑制无效。第二代不可逆TKIs,afatinib和dacomitinib，在体外显示了对T790MEGFR的活性，尽管在临床中可能无法达到这种活性。奥希替尼（9291）在野生型细胞系(A431、LOVO、NCI-H2073)中抑制EGFR磷酸化的作用较弱，平均IC50在480~1865nM之间。　　

　　这与早期TKIs形成了鲜明对比，在野生型株系中，TKIs均能有效地抑制EGFR磷酸化，其效果与致敏突变EGFR相似。通过免疫印迹分析PC-9、H1975、LOVO、H1650和H3255系的裂解液，可以发现EGFR和下游信号通路的磷酸化情况。结果显示，与野生型相比，突变型EGFR细胞中奥希替尼（9291）更有效地抑制了磷酸化EGFR和下游信号底物(pAKT,pERK)，尽管H1650细胞由于PTEN缺失而保留了更高的磷酸化akt水平。　　

　　如前所述，奥希替尼（9291）具有活跃的循环代谢产物，因此我们也对其抗EGFR的活性进行了分析。符合了生化数据,AZ7550表现出非常相似的效力和概要奥希替尼（9291）对突变体和野生型细胞系进行了测试,同时AZ5104存在一些更大的力量反对ex19del中冲(2海里),T790MH1975(2nM)和野生型表皮生长因子受体(33海里lovos)细胞系。　

　　因此，与奥希替尼（9291）相比，AZ5104对野生型EGFR的选择性裕度降低。然而，综合起来，这一机制数据证实了奥希替尼（9291）与早期代药物相比的第三代TKI特性:对致敏突变EGFR具有同等的活性，对T790M具有更好的活性，对野生型EGFR具有更高的选择性裕度。　　

　　然后，我们研究了抗突变和野生型EGFR信号转导的药理活性如何通过Sytox活/死细胞表型终末点转化为细胞增殖效应。符合磷酸化数据,奥希替尼（9291）显示高水平的表型效力在sensitizing-mutant(意味着IC508海里中冲)和T790M(平均11岁和40nM的IC50分别H1975和PC-9VanR)表皮生长因子受体细胞系,同时拥有更少的活动对野生型表皮生长因子受体(平均650和461海里的IC50分别Calu3和H2073)。　　

　　与第二代TKIs、afatinib和dacomitinib相比，第二代TKIs、afatinib和dacomitinib对T790M株的活性低得多，但对野生型EGFR具有更强的效力。为了证实这些结果，我们在一个独立的实验室中对奥希替尼（9291）与EGFR突变肺癌细胞系的同基因对进行了对比。亲本EGFRm+系(PC-9、H3255、HCC827、HCC4006、11-18)对奥希替尼（9291）、erlotinib、afatinib和AZD8931(一种EGFR、HER2和HER3信号转导可逆等效抑制剂敏感。　　

　　然而，只有奥希替尼（9291）对含有EGFRT790M的细胞系表现出低纳摩尔活性(H1975、HCC827/ER1、PC-9/BRc1和H3255/XLR)。有趣的是，奥希替尼（9291）对具有非t790m抗性的株系如11-18/ER(NRAS)、HCC827/ER2(MET扩增)和HCC4006/ER(EMT)无效。在一项单独的大细胞板增殖谱研究中，奥希替尼（9291）在体外对NSCLCNCI-H820和EBC-1细胞系的活性(IC50~1的pcrM)也较差，这些细胞系具有MET扩增和EGFR突变(数据未显示)。与磷酸化-egfr数据一致的是，在表型分析中，代谢物AZ5104再次证明在细胞系中具有更强的效力，而AZ7550大致相似，保持了相同的总体轮廓(。　　

　　由于T790MEGFR的低活性，有研究表明早期TKIs治疗可诱导EGFRm+/T790M的肿瘤细胞的生长选择，导致临床前和临床TKI耐药人群。因此，鉴于奥希替尼（9291）对T790M有较好的疗效，我们推测奥希替尼（9291）治疗后不会出现这种耐药。事实上，长期使用吉非替尼或阿法替尼在体外通常通过获得T790M引起PC-9细胞获得性耐药，但未观察到奥希替尼（9291）至T790M获得性耐药。对奥希替尼（9291）获得性耐药的T790M独立机制的研究正在进行中。详情请扫码咨询：