奥希替尼/泰瑞沙在NSCLC携带EGFR外显子20插入中的抗肿瘤活性

　　在非小细胞肺癌（NSCLC）中，EGFR外显子20插入（Ex20Ins）占EGFR激活突变的4–10％。 EGFR Ex20Ins肿瘤通常对第1代和第2代EGFR抑制剂无反应，对于具有EGFR Ex20Ins的NSCLC患者，当前的护理标准是常规细胞毒性化疗。因此，可以更有效地靶向具有EGFR Ex20Ins突变的NSCLC的EGFR TKI的开发代表了该患者亚组的一项重大进展。 奥希替尼（泰瑞沙）是第三代EGFR TKI，已被批准用于治疗携带EGFR T790M的晚期NSCLC。

　　奥希替尼在EGFR Ex20Ins NSCLC中的活性尚未得到充分评估。使用携带最普遍的Ex20Ins突变的CRISPR-Cas 9工程细胞系，即Ex20Ins D770_N771InsSVD（22％）或Ex20Ins V769_D770InsASV（17％），以及一系列患者来源的异种移植物，我们对奥希替尼和AZ5104（一种循环代谢产物奥希替尼）针对带有Ex20Ins的NSCLC的活动。我们报告奥希替尼和AZ5104在体外抑制Ex20Ins突变细胞系中的信号通路和细胞生长，并证明了在体内存在最普遍的Ex20Ins的EGFR突变型肿瘤异种移植物对肿瘤的持续抑制作用。

　　在本文中使用一系列患者衍生的异种移植模型进一步描述了奥希替尼和AZ5104在携带EGFR Ex20Ins的NSCLC中的抗肿瘤活性。这些数据共同支持了EGFR Ex20Ins NSCLC患者中奥希替尼的临床测试。 表皮生长因子受体（EGFR）外显子20插入（Ex20Ins）共同构成在非小细胞肺癌（NSCLC）中发现的外显子19和框内标准删除后第三大最常见的EGFR激活突变。

　　外显子21中的L858R点突变。这两个突变约占所有EGFR突变的90％，而EGFR Ex20Ins占所有EGFR突变NSCLC的4-10％。 Ex20Ins突变代表框内插入和/或重复的组合，迄今为止已描述了一百多种不同的变异。大多数Ex20Ins突变位于残基M766之后，靠近激酶N叶内C螺旋结构域的末端，但少数映射到C螺旋的中间。 Ex20Ins致瘤性的分子机制仍然知之甚少，而缺乏与疾病相关的模型系统也使情况更加复杂。 与Ex19del和L858R不同，大多数Ex20Ins突变在临床前和临床研究中与对目前批准的一线EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI），厄洛替尼，吉非替尼和阿法替尼具有从头耐药性有关。

　　罕见的A763_Y764insFQEA突变（整个Ex20Ins区段的患病率为6％）是唯一据报告对这些TKI临床敏感的Ex20ins。 尽管最近取得了进展，但晚期NSCLC的长期预后仍然不佳，其5年总生存率低于5％。具有致癌驱动基因突变的NSCLC患者的中位生存期得到改善。但是，对于EGFR Ex20Ins，仍需遵循常规的细胞毒性疗法，类似于EGFR野生型肿瘤的治疗方法。然而，肺腺癌可能依赖于EGFR Ex20Ins，就其生长和生存而言，它们也依赖于其他转化的EGFR突变。因此，对于具有该基因型的患者，可以更有效地靶向具有EGFR Ex20Ins突变的NSCLC的EGFR-TKIs的开发代表了一项重大进步。

　　奥希替尼（Osimertinib）是新一代的EGFR TKI，对经典的激活形式和T790M突变形式的EGFR均具有活性，并已获得批准用于治疗T790M阳性的晚期NSCLC。但是，奥希替尼在EGFR Ex20Ins患者人群中的潜力仍有待充分评估。最近一些使用Ba / F3稳定细胞系的体外研究表明，osimertinib可能对某些Ex20Ins突变有效，但该研究未在与疾病相关的更多模型中检查活性，也未评估体内活性。奥希替尼具有改善目前肿瘤中存在Ex20Ins突变的NSCLC患者的治疗选择的潜力，并值得进行进一步的临床研究。

　　使用改良的Cisbio Pan磷酸化EGFR细胞测定试剂盒测量EGFR磷酸化。在补充有10％FCS的DMEM中，将所有Cos-7细胞在培养瓶中复活16小时。对于Cos-7 ASV和SVD细胞，在最后2小时内，将培养基替换为补充有3％木炭剥离的FCS的DMEM。使用TrypLE™Express Enzyme从培养瓶中分离出Cos-7细胞和H2073，并将其重悬，将每孔600至1400个细胞密度的5μl细胞悬液分配到预先配以的Greiner小体积384代理板中滴定测试化合物并在室温下孵育2小时。

　　最后用200ng/ml EGF刺激H2073，Cos-7 ASV和SVD细胞10分钟。温育2小时后，将2μl在裂解缓冲液中稀释的XL665和Cryptate标记的抗体添加到细胞中，并在室温下温育2小时。然后在具有HTRF模块的Pherastar上读取板。用化合物滴定孵育2小时后确定IC50值。将数据导出到Genedata Screener软件包以生成S形剂量响应曲线，通过确定信号抑制50％的化合物浓度来生成IC50值。如果您有需要购买仿制药奥希替尼，可咨询下方那个微信。