PP2、bosutinib和saracatinib对AKT磷酸化的影响最小。而达沙替尼能更好地抑制AKT磷酸化。此外，达沙替尼在增加细胞凋亡(由cleavedPARP的表达决定)和抑制细胞增殖方面始终比PP2、bosutinib和saracatinib更有效。这些数据表明，还有其他因素通过不完全抑制AKT减弱奥希替尼的作用，而达沙替尼可以抑制这些因素。
焦点粘附激酶(FAK)是已知的相互作用SFKs。值得注意的是，FAK活性可以被达沙替尼抑制，可能是通过一种间接机制。与SFKs类似，我们也注意到奥希替尼处理后FAK的自磷酸化水平增加。因此，我们通过免疫印迹检测了多种egfr突变肺癌细胞中FAK和SFKs的表达，发现在评估的所有细胞系中，奥希替尼处理后，SFK和/或FAK磷酸化程度均有不同程度的增加。
接下来，我们确定PF573228，一种选择性的atp竞争抑制剂FAK，是否可以影响egfr突变细胞对奥希替尼的敏感性。PC-9/BRc1细胞单独或与PF573228和/或PP2联合使用。添加PF573228废除奥希替尼-induced增加FAK磷酸化。奥希替尼结合SFK抑制剂，PP2，抑制SFKs和ERK的磷酸化。奥希替尼/PF573228和奥希替尼/PP2组合都对磷酸化AKT或裂解PARP温和的影响。
然而，奥希替尼、PF573228和PP2三种组合完全抑制FAK和SFKs磷酸化，导致AKT完全抑制，增加cleavedPARP，增强生长抑制作用。在包含波苏替尼或萨拉卡替尼的三联疗法中也观察到了类似的结果。奥希替尼联合达沙替尼可抑制SFKs，并可间接抑制FAK活性，其效果类似于奥希替尼/FAK抑制剂/SFK抑制剂三联疗法。这些数据表明，激活SFKs和FAK均可减弱奥希替尼的作用，同时抑制SFKs和FAK可增强egfr突变肺癌细胞的生长抑制作用。
在PC-9/BRc1异种移植瘤中也检测了达沙替尼与奥希替尼的联合效应。两组均未见明显体重减轻。奥希替尼单药疗法和奥希替尼联合达沙替尼均抑制肿瘤生长至几乎无法检测到的水平。5周后停止治疗，3的7小鼠奥希替尼+达沙替尼治疗手臂没有显示出肿瘤再生(“肿瘤治疗”)，而没有肿瘤治疗奥希替尼单方臂，尽管两臂之间的差异在肿瘤再生情况下无统计学意义(p=0.077)。
鉴于有报道称整合素可以激活SFK/FAK信号，我们检测了存在和不存在奥西替尼治疗时多种整合素的表达情况。整合素αv、β3和β5的表达在奥希替尼治疗后增加。此外，24小时后治疗奥希替尼+SB273005拮抗剂的整合素α5v3β和αβ，我们观察到的更大的一种蛋白激酶抑制ERK独自奥希替尼相比。接下来，因为其他人此前报道称，信息接触影响信号沿着integrin-FAK通路我们调查细胞是否镀在更高的密度不同的回应奥希替尼（AZD9291）镀相比，细胞密度较低。
有趣的是，我们观察到在接触奥希替尼后SFK和FAK活性增加，这在高密度组更为明显。这些效应与整合素通过SFK/FAK激活下游信号通路的假设一致。为了进一步研究整合素对SFK/fak介导的AKT和MAPK信号通路的必要性，我们测定了整合素配体vitronectin对整合素复合物αvβ3和αvβ5的影响。本实验PC-9/BRc1细胞在无血清培养基中培养，因为血清中含有大量的细胞外基质成分，包括vitronectin。与我们的假设一致，包裹vitronectin的细胞培养皿减弱了奥希替尼的作用，而纤维连接蛋白涂层则没有。综上所述，这些数据表明整合素激活FAK/SFKs，从而减弱奥希替尼（泰瑞沙）的作用。
整合素在奥希替尼持续抑制EGFR信号通路下，可激活SFK/FAK，导致持续的AKT和ERK磷酸化。AKT或MAPK通路抑制剂通过直接抑制各自的下游信号通路增强奥希替尼的作用，而达沙替尼通过抑制SFK/FAK增强奥希替尼的作用，导致同时抑制AKT和MAPK通路。详情请扫码咨询：
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