奥西替尼(AZD9291)耐药能用帕博西尼吗

　　以奥西替尼（AZD9291）为代表的第三代EGFR-TKI已在临床实践中得到广泛应用。但是，最终还是出现了抵抗。目前，尚不清楚异常细胞周期是否与获得性耐药有关，palbociclib（CDK4 / 6抑制剂,帕博西尼）和奥西替尼的组合能否克服第三代TKI耐药。

　　方法：我们建立了源自EGFR突变NSCLC细胞H1975的AZD9291耐药细胞（H1975 OR）。使用Cell Counting Kit-8（CCK8）评估了对细胞的药物作用。用蛋白质印迹分析检测蛋白质改变。RT-PCR用于评估基因mRNA的差异。使用流式细胞仪比较H1975 S和H1975 OR细胞的细胞周期分布。

　　结果：与H1975相比，H1975OR对CDK4 / 6抑制剂的敏感性增加，G1期的细胞比例减少。在H1975OR中，CDK4，CDK6的mRNA水平和CDK4，pRB的蛋白水平升高。在H1975OR细胞中，palbociclib显着增加了G1期细胞的比例。AZD9291和palbociclib的组合可通过细胞周期停滞协同降低H1975OR的存活率。发现联合治疗可通过抑制CDK4 / 6的功能来抑制RB的初始磷酸化，从而显着降低p-RB的水平并阻止细胞增殖。

　　结论

　　成功建立了奥西替尼获得性耐药细胞系（H1975 OR）。细胞周期相关基因的表达在H1975OR中发生了改变。H1975OR细胞中CDK4的表达和CDK4 / 6的下游分子Rb的磷酸化增加。CDK4 / 6抑制剂palbociclib和AZD9291的组合可以克服获得性的AZD9291耐药性。

　　EGFR TKI的获得性耐药是不可避免的。第一代EGFR TKI治疗后，两项研究报告说，50％-60％的患者被发现有T790M突变，并在另一项研究中三代TKIAZD9291的应用仍然能够达到10个月以上患者的PFS。然而，最终出现了对第三代EGFR TKI奥西替尼的抗药性，但其潜在机制尚不清楚。据报道，C797X突变对奥西替尼的耐药机制仅为10％–15％。其他机制包括旁路激活，继发突变，肿瘤类型转化等。在AZD9291获得性抗性，异常细胞周期调节已被报道是很常见的，包括CCND1扩增，CCND2放大，CCNE1，CDK4，CDK6扩增和CDKN2A突变。的第一行约10％患者和与AZD9291处理过的第二行的患者的12％被认为是为异常细胞周期调控的结果有抗性。因此，异常的细胞周期调节是获得对奥西替尼耐药的重要机制。

　　目前，CDK4 / 6抑制剂对细胞周期调节，由FDA批准的药是palbociclib，rebociclib，和abemaciclib，主要用于HR阳性乳腺癌的治疗。研究表明，单一CDK4 / 6抑制剂与内分泌疗法联合给药可达到良好的治疗效果，从而显着延长了患者的PFS和OS。CDK4 / 6抑制剂也已探索在肺癌的治疗中，但单一试剂治疗的效力已被发现是有限的，用0％之间的ORR -8％，这是不足够高到煽动在临床实践中广泛使用单一CDK4 / 6抑制剂。

　　但是，CDK4 / 6抑制剂可能在治疗患有EGFR敏感突变的TKI获得性耐药患者中发挥作用。先前的研究表明，吉非替尼联合CDK4 / 6抑制剂palbociclib在吉非替尼获得性耐药细胞中可以部分逆转耐药性，这一点已在PC9 / AB2中得到证实。尚不知道AZD9291和palbociclib的组合能否克服AZD9291获得性耐药。我们在实验室建立了由奥西替尼获得的耐药细胞株H1975OR。这项研究的目的是使用H1975OR细胞系研究单一药物palbociclib或与AZD9291的组合是否可以克服获得性耐药和潜在的机制。

　　在这里，我们表明在耐奥西替尼的肺癌细胞中CDK4的表达和Rb的磷酸化增加。用palbociclib抑制CDK4 / 6会显着增强耐药细胞对奥西替尼的敏感性。我们的研究为AZD9291耐药机制提供了新的思路，并为靶向CDK4 / 6作为在肺癌治疗中克服第三代EGFR-TKIs的潜在疗法提供了理论依据。微信扫描下方二维码了解更多：