检测乐伐替尼7080的增殖抑制活性

　　乐伐替尼是一种低分子量的口服VEGFR抑制剂，目前正在进行其用于治疗多种癌症的临床试验。在这里，我们表明HGF通路参与乐伐替尼治疗的耐药性，并且乐伐替尼和golvatinib(一种低分子量的口服Met抑制剂)的联合使用在临床前模型中能够有效克服这种耐药性。　　

　　肝细胞生长因子与VEGF协同促进血管生成，给予乐伐替尼抗HUVECs增殖抑制作用　　

　　我们首先检测了VEGF和HGF在体外血管生成模型HUVECs中的作用。与对照相比，添加VEGF或HGF均能显著促进HUVECs毛细血管样血管的增殖和网络形成。聚集有关VEGF和HGF增强扩散管形成HUVECs显著更大程度上比获得与单一治疗，和网络形成后聚集有关更密集和复杂的分支比诱导通过单因素。　　

　　接下来我们检测乐伐替尼的增殖抑制活性，乐伐替尼是一种有效的VEGFR抑制剂，但不是Met抑制剂。在单独VEGF刺激的HUVECs中，乐伐替尼在IC501.6nM处抑制增殖，抑制率达到约80%的高原期。而VEGF+HGF组乐伐替尼抑制活性降低(IC50为5.5nM；这表明加入HGF的HUVECs对乐伐替尼具有耐药性。　　

　　然后我们测试了atp竞争的Met抑制剂golvatinib1a对hgf诱导的乐伐替尼耐药的影响。VEGF+HGF刺激后，golvatinib联合乐伐替尼对HUVECs的增殖抑制作用显著大于单独使用golvatinib或乐伐替尼。为了阐明内皮细胞内的信号转导事件，我们用VEGF、HGF或HGF和VEGF联合处理HUVECs。血管内皮生长因子诱导VEGFR2和Erk1/2磷酸化，乐伐替尼抑制这两种磷酸化。　　

　　肝细胞生长因子诱导Met、Akt和Erk1/2磷酸化，golvatinib抑制Met、Akt和Erk1/2磷酸化，乐伐替尼则不抑制Met、Akt和Erk1/2磷酸化。VEGF和HGF处理HUVECs时，乐伐替尼抑制VEGFR2的磷酸化，但Akt和Erk1/2仍处于激活状态。当乐伐替尼与Met抑制剂golvatinib联用时，Akt和Erk1/2的磷酸化被抑制。这些结果表明，HGF对vegf驱动的HUVECs对乐伐替尼产生耐药性，而与golvatinib联合治疗可以避免这种耐药性。　　

　　SEKI是人黑色素瘤细胞系，培养上清富含HGF和VEGF。SEKI培养上清液较对照组显著促进HUVECs增殖。乐伐替尼（乐伐替尼7080）、人hgf中和抗体或golvatinib单独处理均对SEKI培养上清液促进的HUVECs增殖有中度抑制作用。与此相反，乐伐替尼与人hgf中和抗体或golvatinib联合使用均可显著抑制SEKI培养上清液促进的HUVECs增殖。结果提示，SEKI细胞产生的VEGF和HGF促进HUVECs的增殖，SEKI培养上清中HGF对乐伐替尼治疗产生耐药性。详情请扫码咨询：