乐伐替尼/乐卫玛的全球临床研究

　　生物分析方法的交叉验证研究对于确保所有进行样品分析的研究地点的分析数据能够在整个临床试验过程中进行比较非常重要。为了支持新型多靶点酪氨酸激酶抑制剂乐伐替尼的全球临床研究，五个实验室开发了液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的7种生物分析方法。在这项研究中，方法最初在每个实验室根据生物分析指南进行验证。　　

　　为了随后的实验室间交叉验证，对乐伐替尼盲法浓度的质控(QC)样本和临床研究样本进行分析，以确认相似的分析数据。采用蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取等方法提取乐伐替尼和内标物，然后采用LC-MS/MS多反应监测的正离子电喷雾模式检测。在每个实验室开发的测定方法成功地验证了参数内的接受标准推荐的指南。在交叉验证研究中，QC样品的准确性在±15.3% 和临床研究样本比例偏差在± 11.6%。这些发现表明，乐伐替尼在人血浆中的浓度可以通过实验室和临床研究进行比较。　　

　　乐伐替尼是一种新型的多靶点酪氨酸激酶抑制剂，可抑制血管内皮生长因子受体1-3、成纤维细胞生长因子受体1-4、血小板源性生长因子受体-3、c-Kit和RET(转染过程中重组)。乐伐替尼注册名称为LENVIMA®，用于治疗进行性、分化性甲状腺癌的单药治疗和晚期肾细胞癌与依维莫司联合治疗。　　

　　在获得监管部门批准之前，在全球开展了一些临床研究，五个生物分析实验室建立了测定人血浆中乐伐替尼浓度的分析方法。据我们所知，已经报道了两种用于乐伐替尼的生物分析方法；乐伐替尼及其代谢物在人血浆、尿液和粪便中测定，乐伐替尼在人血清和磷酸盐缓冲盐中测定，用于蛋白结合研究。　　

　　本研究报道了人血浆中乐伐替尼浓度的生物分析方法。本研究的第一个目标是展示乐伐替尼的分析方法和每个实验室的验证参数的全面列表。本研究的第二个目标是评估所有进行乐伐替尼测定的生物分析实验室是否都具有可比性数据，以确保乐伐替尼的药代动力学参数可以通过临床试验进行比较。　　

　　虽然每种方法的成功验证是进行临床样本分析的先决条件，但根据欧洲药品管理局和美国食品和药物管理局的生物分析指南，交叉验证研究也需要比较生物分析方法和/或实验室之间的浓度。除了满足监管要求之外，进行交叉验证研究的科学依据是，在使用多种生物分析方法和在临床试验中进行药代动力学比较时，确保实验室间的生物分析数据具有可比性。　

　　在许多报道的研究中已经进行了交叉验证，对浓度未知的临床研究样本(剂量后样本)或两者浓度已知的质控(QC)样本进行了量化。在目前的实验室间交叉验证研究中，一个中心实验室制备的QC样品在5个生物分析实验室使用7种经过验证的方法进行了分析。此外，对两个实验室的临床研究样本进行分析，以进一步支持数据的可比性。　　

　　首先在卫材株式会社(日本东京)建立了人血浆中乐伐替尼的生物分析方法，并转移到A实验室进行方法验证研究。在A实验室完成验证研究后，将该方法转移到其他实验室进行方法验证，必要时进行一些修改(如分析柱、流动相组成、梯度条件等)。尽管提取和分析条件有一些变化，但所有生物分析实验室的验证参数都符合接受标准，这确保了用于支持乐伐替尼临床研究的样品分析的检测方法的健壮性。　　

　　在E1和E2方法的结转评估中，>20%LLOQ的结转峰出现在ULOQ样品后注射的空白样品中，原因尚待分析。由于E1(2000-fold)和E2(1000-fold)方法的动态范围并不比另一种没有结转的方法宽，因此结转不属于较宽的动态范围。一般认为，最佳的注入器洗涤溶剂可以克服结转问题。方法E1中使用了两种进样洗涤溶剂；异丙醇-乙腈-水-甲醇-丙酮-二甲基亚砜中1%三氟乙酸(1:1:1:1:0.5，v/v/v/v)和0.05%甲酸(1:1，v/v)E2方法采用0.1%甲酸甲醇和0.1%甲酸50%甲醇作为进样洗涤溶剂。虽然某些有机溶剂(如异丙醇)的增加可能克服结转问题，但不幸的是，这些洗涤溶剂没有解决结转问题。为了解决支持临床试验的样品分析中的结转问题，我们评估了结转对每个样品中乐伐替尼浓度的潜在影响。接受标准是由于结转而导致的过高估计乐伐替尼水平小于确定的乐伐替尼水平的20%。当样品中乐伐替尼的浓度因搬运而受到影响时，对有问题的样品进行再分析。　　

　　当临床试验过程中有多个实验室参与样品测定时，以及在单个研究的样品测定中使用多种测定方法时，交叉验证研究是重要的。尽管从bb0和的监管角度来看，生物分析指南要求进行交叉验证研究，但药物动力学数据不能在多个临床试验之间进行整合或比较，除非方法和实验室之间的生物分析数据具有可比性。许多交叉验证研究已经在以前的出版物中报道过:典型的交叉验证研究包括使用不同方法之间的比较分析平台(如质/女士与ELISA)，比较的方法使用不同的检测设备(如质vsLC/MS紫外和荧光检测，在同一平台的不同分析物集(例如单分析vsn-in-1化验)，一个不同的矩阵(如血清、血浆)，另一个使用相同的平台，在实验室之间做了一些修改。本研究属于最后一种类型；交叉验证研究使用相同的平台(即LC-MS/MS)，但方法有所修改。　　

　　在本研究中，根据指南的建议，采用QC样本和临床用药后样本进行了交叉验证研究。每个实验室的QC样品均符合验收标准。虽然剂量后样本容量有限，不能在所有实验室进行剂量后样本的分析，但本研究的结果表明，包括剂量后样本在内，两个实验室的分析数据具有可比性。总的来说，使用QC样本和剂量后样本的交叉验证研究的这些发现表明，可以在生物分析实验室和临床研究中比较血浆乐伐替尼(仑伐替尼)浓度。详情请扫码咨询：