奥希替尼/9291可以通过抑制p-Akt和EGFR

　　T790M突变被认为是对第一代超热生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)如吉非替尼(gefitinib)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者获得性耐药的典型机制，这些患者通常使用EGFR-TKI奥希替尼（9291）(osimertinib)进行治疗。然而，对于没有t7.9亿的非小细胞肺癌患者，克服对EGFR-TKIs获得性耐药的治疗策略仍有待确定。　　

　　在本研究中，将NSCLC细胞株H1650或H1975暴露于浓度逐渐升高的吉非替尼或奥希替尼（9291）11个月后产生耐吉非替尼H1650(H1650GR)或耐奥希替尼（9291）H1975(H1975AR)。通过MTT法测定半最大抑菌浓度(ic50)来评价吉非替尼和奥希替尼（9291）的体外细胞毒作用。吉非替尼在H1650GR中IC50(50.0±3.0大鼠M)显著高于H1650(31.0±1.0大鼠M)(p<0.05)。奥希替尼（9291）在H1975AR组的IC50(10.3±0.9±M)较H1975组(5.5±0.6±M)显著增高(p<0.05)。然而，与H1650相比，奥希替尼（9291）在H1650GR上的IC50(8.5±0.5°M)没有增加(9.7±0.7°M)。　　

　　另一方面，奥希替尼（9291）对耐吉非替尼的A549(我们前期研究建立的A549GR)的IC50(12.7±0.8个我院(A549)(7.0±1.0个我院(p<0.05)显著提高(p<0.05)。奥希替尼（9291）在A549、H1650和H1650GR中诱导caspase3/7的激活，而在A549GR中没有。Westernblot分析显示，p-Akt在测定A549、A549GR、H1650和H1650GR对gefitinib或奥希替尼（9291）的敏感性中起关键作用。　　

　　此外，在获得性EGFR-TKI耐药的所有细胞中，我们观察到Twist1表达增加，shRNA敲低Twist1可以通过逆转上皮间质转化(EMT)和下调p-Akt，显著提高A549GR对gefitinib或奥希替尼（9291）的敏感性，而H1975AR对奥希替尼（9291）的敏感性则没有提高。体外Twist1敲除可增强奥希替尼（9291）对A549GR的细胞毒性，而体内研究进一步证实了Twist1敲除可显著延迟A549GR异种移植瘤的生长，且对奥希替尼（9291）治疗的裸鼠敏感性增强，未观察到任何毒副反应。　　

　　综上所述，我们的研究表明，即使是同样的EGFR-TKI治疗不同的NSCLC细胞系，其获得性耐药机制也可能存在很大差异，这为不同异质性突变状态下获得性EGFR-TKI耐药的NSCLC患者采取不同的治疗策略提供了依据。　　

　　本研究发现奥希替尼（9291）可以通过抑制p-Akt和EGFR，在H1650GR中有效克服gefitinib在T790M条件下的获得性耐药。另一方面，A549GR对奥希替尼（9291）的交叉耐药表现为对奥希替尼（9291）处理后的p-Akt的收敛活化。进一步的CSC标记分析显示，与H1650相比，H1650GR显著降低CD133的表达，这可能解释了为什么H1650GR在锚点独立生长检测中显示出显著降低的致瘤潜力。　　

　　通过shRNA敲除Twist1，A549GR获得性显著降低，对吉非替尼或奥希替尼（9291）的敏感性显著提高。进一步的机制研究表明，A549GR中Twsit1的下调不仅逆转了EMT，还下调了p-Akt。体内研究还表明，与A549和A549GR相比，A549GR基因中Twist1的敲除可显著延迟肿瘤生长，并增加奥希替尼（9291）的致敏性。　　

　　然而，同样的Twsit1沉默策略在没有C797S突变的H1975AR中并不能有效克服奥希替尼（9291）获得性耐药，其耐药机制不是通过EMT，而是通过EGFR表达降低。综上所述，我们的研究结果表明，即使是同样的EGFR-TKI治疗的不同NSCLC细胞系，其获得性耐药机制也可能存在很大差异，这为基于癌突变异质性的获得性EGFR-TKI耐药NSCLC患者采取不同的治疗策略提供了依据。详情请扫码咨询：