奥希替尼/泰瑞沙在PC9细胞中显示了适度的活性

　　然后，我们评估了布加替尼和其他TKI对三联del19阳性肺癌细胞系的有效性。 CellTiter-Glo分析表明，吉非替尼，奥希替尼（泰瑞沙）和布加替尼与PC9亲代细胞（单独的del19）和双突变型（T790M / del19）或三突变型（C797S / T790M / del19）细胞的生长受到抑制在表达相应突变类型的Ba/F3细胞中观察到的结果。在蛋白质印迹中，在PC9三突变细胞中，只有布加替尼抑制EGFR磷酸化及其下游信号传导。与观察到PC9亲本和T790M细胞中EGFR信号转导减少的观察相反，阿法替尼和奥希替尼在这些细胞中未产生信号途径的减少。

　　AZD3463在这些PC9细胞中显示了适度的活性，用Western印迹评估。此外，这三种EGFR–TKIs在具有T790M/del19的埃罗替尼失败患者的MGH121亲本细胞和表达三重del19的MGH121耐药2细胞中显示出相同的模式。为了证实布加替尼对抗三突变EGFR的优越活性，我们通过向表达EGFR-triple-del19的裸鼠施用布加替尼或奥希替尼进行了体内实验，以证实布加替尼对三突变EGFR具有优越的活性。皮下注射了PC9肺癌细胞。结果，与赋形剂对照和奥希替尼治疗的组相比，用布加替尼治疗的小鼠显示出对PC9-三联突变细胞生长的显着抑制，而无明显毒性。

　　实际上，布加替尼在从小鼠获得的肿瘤样品中抑制了EGFR的磷酸化及其下游信号传导。使用表达EGFR-triple-del19的Ba/F3细胞而非PC9细胞的类似实验证实了这种体内功效。值得注意的是，奥希替尼和布加替尼（75μmg·kg-1）均成功抑制了表达T790M / del19的PC9细胞的生长。这些结果表明，布加替尼不管细胞类型如何都利用了三重突变，将有望克服第三代EGFR-TKI的获得性耐药。为了获得更好的治疗效果和缩小肿瘤，根据我们在未来研究中进行的结构分析，开发出比布加替尼更有效的抑制剂非常重要。

　　在临床前模型和患者中使用EGFR–TKI，我们评估了布加替尼和cetuximab或panitumumab联合使用对三突变EGFR的影响。使用Cell-Titer Glo试剂盒进行的细胞生存力分析表明，西妥昔单抗增强了布加替尼或AP26113-analog对抗三联del19 Ba / F3细胞的功效，IC50降低了约三倍，而在奥希替尼中未获得协同益处。使用蛋白质印迹观察到了布加替尼和西妥昔单抗联合对下游途径的增强抑制作用。这些效应在细胞活力测定和蛋白质印迹分析中均在三突变肺癌细胞系中重现。其他抗EGFR抗体，帕尼单抗与布加替尼组合，显示出相似的生长抑制作用。

　　为进一步了解与抗EGFR抗体组合的益处，我们评估了PC9三联体中EGFR的细胞表面表达西妥昔单抗，布加替尼和布加替尼+ cetuximab联合处理0、6、24和48μh后，细胞会发生突变。通过流式细胞术对处理过的细胞进行的EGFR表达分析显示，随着时间的推移，使用布加替尼+cetuximab的细胞表面EGFR水平显着下降，而单独使用西妥昔单抗则有中等程度的下降，但是单独使用布加替尼则没有降低。相应处理的细胞的蛋白质印迹分析表明，当联合使用布加替尼和西妥昔单抗处理细胞时，西妥昔单抗可实现总细胞EGFR的降低，并且该组合还增强了EGFR磷酸化的抑制以及下游信号传导。

　　另外，相同的实验证实了使用表达三-del19突变的表达EGFR的MGH121-res2细胞抑制了总的和细胞表面EGFR的表达。这些结果表明，通过由西妥昔单抗引起的表面上EGFR的变性，诱导了布加替尼和西妥昔单抗的协同作用，从而导致了布加替尼疗效的增强。然后，我们与载体对照，单独的布加替尼，单独的奥希替尼，单独的cetuximab，奥希替尼和cetuximab的组合以及布加替尼和cetuximab的组合进行比较，如上所述进行了PC9三突变异种移植细胞的体内实验。与其他治疗组相比，布加替尼和西妥昔单抗的组合具有明显的抑制肿瘤生长的作用，并且没有延长毒性，与其他治疗组相比，尤其是奥西替尼治疗组，其生存期延长，对对照组没有任何优势。

　　我们证实，其功效取决于在从每个治疗组获得的肿瘤样品的蛋白质印迹中，EGFR磷酸化的抑制作用和EGFR本身表达的降低。 Panitumumab是另一种用于治疗结直肠癌患者的抗EGFR抗体，在体内实验中显示出与西妥昔单抗相当的协同作用。通过与帕尼单抗组合也可诱导协同作用，表明并发抗EGFR抗体的重要性，无论其作用方式如何。使用MGH121-res2细胞的另一种EGFR三重突变的肺癌异种移植模型不仅显示出使用布加替尼的生长抑制作用，而且显示出通过西妥昔单抗和布加替尼的联合治疗而无毒性的显着肿瘤缩小。现在奥希替尼的仿制药价格是多少？更多详情可咨询下方微信。