为了调查EGFRTKI耐药的分子驱动因素,我们分析了从亲本和32个耐药群体中制备的DNA样本,利用多个检测平台分析了一组癌症相关基因中存在的基因突变和/或拷贝数变化。每个检测到的突变至少在2个不同的实验平台上被证实。
PC9数量,7/8吉非替尼和2/3afatinib抗性种群已经检测到T790M突变,而没有一个人口耐WZ4002或奥希替尼获得了可检测T790M突变。T790M吉非替尼耐药的人群主要是显示奥希替尼敏感性,与剂量反应曲线表明几乎所有细胞种群PC9GR_4,6和7是敏感奥希替尼。然而,PC9GR_1(T790M,KRAS增益5.43倍)、PC9GR_3(T790M)和PC9GR_5(T790M)群体中只有不到50%的细胞对奥希替尼的生长抑制敏感,表明这些群体具有异质性耐药机制。
所有奥希替尼敏感细胞的IC50值相似。虽然在PC9GR_8(T790M,KRAS增加7.06倍)群体中检测到T790M,但这些细胞对奥希替尼不敏感,表明整个群体包含耐药克隆。人群中对吉非替尼耐药的异质性机制的观察与临床情况一致,支持使用该人群方法来了解耐药动态。
值得注意的是,缺乏可检测T790M的PC9耐药细胞群在结合EGFR抑制时,经常表现出对西鲁美替尼的敏感性增加。在selumetinib敏感的EGFRm/t7.9亿诱导EGFR抑制剂耐药性的人群中,未检测到额外的EGFR突变。这表明,在没有EGFR信号的情况下,RAS-MAPK信号对于驱动耐药是重要的。
有趣的是许多不同的国家管制当局方面改变观察PC9人群抗奥希替尼,吉非替尼和WZ4002NCI-H1975细胞抵抗奥希替尼。值得注意的是,我们观察到一种新颖的非规范E63K突变在国家管制当局方面唯一gefitinib-resistantT790M-negativePC9人口和在两个奥希替尼(泰瑞沙)-resistantPC9数量。这种新的NRAS突变发生在与KRAS(27)和HRAS(28)中观察到的体细胞突变平行的功能区域内。我们还在2个不同的奥希替尼耐药的PC9群体中发现了具有激活功能的NRASG12V和G12R突变。这是首次在NSCLC中发现G12VNRAS。
除了基因突变外,抗药群体中还检测到MAPK1、CRKL、NRAS和KRAS拷贝数增加,NRAS和KRAS的增加导致蛋白水平升高。特别有趣的是,在对奥希替尼部分敏感的T790MPC9_GR_1群体中观察到KRAS增益,表明KRAS参与了该群体对吉非替尼的异质性抗性机制。实际上,随后产生了4个单独的奥希替尼耐药的PC9GR_1细胞群体,并在每个耐药群体中保留了KRAS增益。有趣的是,尽管在PC9GR1_AZDR_1、3和4群体中仍然存在t7.9m,但在PC9GR1_AZDR_2细胞中不再检测到t7.9m。详情请扫码咨询:
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