依鲁替尼/伊布替尼可降低脂多糖诱导的促炎细胞因子水平

　　依鲁替尼不发挥毒性作用，对BV2小胶质细胞的浓度高达25°M　　

　　为了测试依鲁替尼对神经炎症的影响，我们首先检查依鲁替尼是否对BV2小胶质细胞有毒性。BV2小胶质细胞用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(100、250、500、750或1000nM)处理24小时，并进行MTT检测。依鲁替尼在低剂量时没有表现出毒性。我们还检查了高剂量的依鲁替尼对细胞活力的影响。为此，将BV2小胶质细胞用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼处理24小时，并进行MTT检测。我们发现，依鲁替尼在浓度高达25°M时不会诱导BV2小胶质细胞毒性。　　

　　确定依鲁替尼LPS-induced形态学的改变BV2小胶质细胞，细胞使用依鲁替尼(1μM)或车辆(1%DMSO)30分钟，接着用有限合伙人(1μg/ml)或PBS为5.5h。细胞被固定在4%多聚甲醛和应用anti-CD11b抗体。与经车载处理的细胞相比，经脂多糖处理的BV2小胶质细胞显示出长而细的突起，从胞体延伸。依鲁替尼预处理后再进行LPS处理，减少了从细胞体延伸出的长而细的突起数量，这些细胞的形态类似于经溶剂处理的细胞。　

　　依鲁替尼可显著降低脂多糖诱导的促炎细胞因子水平　　

　　调查潜在的监管依鲁替尼对促炎反应的影响，BV2小胶质细胞处理车辆(1%DMSO)或依鲁替尼30分钟(1μM)，其次是有限合伙人(1μg/ml)或PBS为5.5h。总RNA分离，用rt-pcr和促炎细胞因子水平测定。与不加LPS的溶剂对照治疗相比，单独使用依鲁替尼并没有改变任何促炎细胞因子水平。然而，依鲁替尼显著降低了脂多糖诱导的促炎细胞因子COX-2、IL-6、IL-1的蛋白转移酶、iNOS和TNF--a的mRNA水平。作为一种替代方法，我们使用免疫细胞化学。在本实验中，BV2小胶质细胞分别用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(1°M)处理30min，LPS(1°g/ml)或PBS处理5.5h，然后用抗cd11b和抗cox-2抗体进行免疫染色。依鲁替尼可显著降低脂多糖诱导的BV2小胶质细胞COX-2水平。为了进一步证实这些发现，我们进行了IL-1ELISA试验。为此，用依鲁替尼(500nM)或溶剂对照液(1%DMSO)预处理BV2小胶质细胞30分钟，用LPS(100ng/ml)或PBS处理24小时，并进行IL-1ELISA检测。与上述结果一致的是，与LPS处理相比，依鲁替尼显著降低了LPS诱导的IL-1蛋白的水平。这些结果表明，依鲁替尼预处理可调节脂多糖介导的BV2小胶质细胞促炎反应的增加。　

　　然后我们研究了依鲁替尼治疗后是否会改变脂多糖刺激的促炎反应。将BV2小胶质细胞用LPS(1磅/毫升)或PBS处理30分钟，然后用溶剂对照(1%DMSO)或依鲁替尼(1磅/毫升)处理5.5小时，分离总RNA，用RT-PCR检测促炎细胞因子水平。同样，与不使用LPS的载体治疗相比，依鲁替尼本身并没有降低任何促炎细胞因子的水平。然而，依鲁替尼治疗后显著降低了脂多糖诱导的COX-2、IL-6和iNOS的mRNA水平，但不降低其他促炎细胞因子的mRNA水平。因此，这些数据表明，依鲁替尼预处理(作为一种预防措施)或治疗后(作为一种治疗措施)对脂多糖刺激的BV2小胶质细胞的促炎反应有差异。　　

　　依鲁替尼抑制脂多糖刺激的原发性小胶质细胞促炎细胞因子水平的增加　　

　　为了确定依鲁替尼（伊布替尼）是否能调节LPS诱导的原代胶质细胞的促炎反应，我们将原代小胶质细胞分别用vehicle(1%DMSO)或依鲁替尼(1，M)处理30分钟，然后用LPS(1，l，g/ml)或PBS处理5.5小时。然后用RT-PCR检测促炎细胞因子水平。LPS治疗显著上调了促炎细胞因子的水平。相比之下，依鲁替尼显著下调了脂多糖介导的原代小胶质细胞中编码促炎细胞因子COX-2和IL-6的mrna水平的升高。　　

　　然后我们研究了依鲁替尼是否也影响脂多糖刺激的原代星形胶质细胞促炎细胞因子水平。将原代星形胶质细胞用溶剂对照液(1%DMSO)或依鲁替尼(1，1，M)处理30分钟，用LPS(1，1，g/ml)或PBS处理5.5小时，然后用RT-PCR检测促炎细胞因子水平。令人惊讶的是，依鲁替尼并没有降低脂多糖诱导的原始星形胶质细胞中任何促炎细胞因子的水平。这些数据表明依鲁替尼选择性地影响促炎反应取决于细胞类型。依鲁替尼可以在老挝东盟买到吗？详情请扫码咨询：