维奈托克/威托克在人类中的安全性

　　SCLC的一个子集对维奈托克（威托克）过敏　　

　　维奈托克（威托克）是第一种BCL-2类选择性抑制剂，最近fda批准用于至少接受过一次治疗的有17p缺失的慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者。基于其安全性和强大的抗癌活性，我们对维奈托克（威托克）进行了跨多种癌症类型的高通量筛选，目的是识别可能对维奈托克（威托克）产生反应的其他癌症。我们筛选出了950多株细胞系，其中791株来自实体瘤。在实体瘤细胞株，神经母细胞瘤的一个子集(MYCN-amplified)和SCLC维奈托克（威托克）特别敏感。更长的治疗时间5-7天并没有变化的敏感度的不同SCLC细胞系维奈托克（威托克）。此外，一个明确的剂量反应维奈托克（威托克）bcl-2NCI-H187高(AUC=0.965)观察细胞系。相比之下，低BCL-2NCI-H524(AUC=0.987)在给予最大剂量前均未受到影响。由于巩膜巩膜对初始铂类化疗敏感，我们以1：15.5的比例对维奈托克（威托克）与顺铂-依托泊苷进行了测试。在这里，我们发现在不同浓度的维奈托克（威托克）中，在化疗的6个细胞系中的4个在较高浓度的化疗中存在微弱的协同作用。这些数据表明这种临床化合物可能有新的适应症。　　

　　敏感巩膜以高BCL-2表达来区分　

　　接下来，我们试图研究维奈托克（威托克）的直接靶点BCL-2的表达水平是否可以预测SCLC中的反应。通过GDSC数据库，在筛选出的56个SCLC细胞系中，有52个细胞中有BCL-2的RNA表达水平。我们发现，对维奈托克（威托克）的敏感性与BCL-2表达呈正相关。相比之下，bcl-2mRNA和蛋白表达谱的其他杰出的成员，包括BCL2L11(BIM)，没有进一步预测敏感性。而大型制药屏幕上的研究表明，目标表达不一致预测药物反应，这些数据表明，bcl-2可能就构成一个有效的预测生物标志物在SCLC维奈托克（威托克）bcl-2表达高SCLC带来更好的反应。　　

　　BCL-2的甲基化参与了其表达　　

　　接下来，我们评估了与其他癌症相比，在巩膜癌中BCL-2的表达，以证实之前的研究结果，即BCL-2在SCLC中的表达普遍较高，这暗示了BCL-2的潜在依赖性。我们使用来自GDSC和癌症细胞系百科全书(CCLE)资源的BCL2mRNA表达数据，确实发现SCLC细胞系比包括NSCLC在内的其他实体肿瘤细胞系平均BCL2表达水平更高。接下来，我们询问这种关系是否也适用于患者的肿瘤。由于现有肿瘤材料的限制，SCLC肿瘤的生物标志物评估具有挑战性。我们鉴定了来自SCLC肿瘤的两个基因表达数据集，发现SCLC肿瘤中BCL-2的表达显著(P<0.001)高于NSCLC肿瘤。这些数据证实了BCL2在SCLC细胞系和肿瘤中的高表达。　　

　　由于BCL-2在SCLC中扩增，我们探究了是否DNA扩增单独导致BCL-2表达水平升高。我们发现BCL2扩增确实与BCL2表达相关。然而，我们注意到BCL2RNA水平在每个拷贝数类别中差异很大。BCL2基因在转录起始位点(TSS)的上游有一个CpG岛。鉴于CpG岛经常参与基因表达的调控，我们想知道DNA甲基化是否可能在BCL-2的表达中发挥作用。利用GDSC获得的甲基化数据，我们发现，在CpG岛内，2-和3-BCL2拷贝数细胞株的甲基化都存在差异，BCL-2表达越低的细胞，甲基化程度越高。这些结果表明，表观遗传调控BCL-2表达在SCLC中起重要作用，与BCL2拷贝数无关。　　

　　维奈托克（威托克）通过破坏BIM：BCL-2复合物杀死SCLC细胞系　　

　　接下来我们研究了维奈托克（威托克）在SCLC细胞系中的杀伤模式。流式细胞仪分析π/膜联蛋白Cy5彩色SCLC细胞表明1μM维奈托克（威托克）诱导标志着细胞凋亡在治疗期间的72小时高BCL-2-expressingNCI-H510ADMS-53细胞，大幅减少相应可行的细胞在同一治疗期。相比之下，抗venetoclas细胞系在同样的处理72小时内，细胞凋亡没有明显增加。重要的是，在这些测定中使用的浓度是基于用维奈托克（威托克）观察到的稳态药代动力学的临床相关的。免疫沉淀在NCI-H510A和DMS-53全细胞裂解液中，通过BIM：BCL-2复合物的分离判断，显示了维奈托克（威托克）的靶向活性。与过去的报道一致，维奈托克（威托克）导致了BIM：mcll-1综合体的增加，我们也注意到BIM：BCL-xL综合体的增加。BIM敲除降低了维奈托克（威托克）对NCI-H510A和DMS-53细胞的疗效，进一步证明了维奈托克（威托克）以BIM介导的方式杀伤细胞。总之，这些数据表明，维奈托克（威托克）通过破坏BIM：BCL-2复合体在SCLC中靶向杀伤，导致BIM依赖的凋亡。　　

　　维奈托克（威托克）对高BCL-2表达的SCLC小鼠模型有效　　

　　接下来，我们评估了维奈托克（威托克）在高BCL-2表达的DMS-53小鼠模型中抑制肿瘤生长的能力。每天1次给予100mg/kg维奈托克（威托克）治疗可使肿瘤显著缩小。这些小鼠表现出很少甚至没有体重减轻，也没有其他明显的毒性迹象，反映出维奈托克（威托克）在人类中的安全性。与我们的假设一致，低BCL-2异种移植模型NCI-H82。　　

　　我们将分析扩展到三种通过Westernblot检测BCL-2高表达的患者来源的异种移植(PDXs)(Sup.Fig.8)，包括chemorefractoryLU86模型。使用相同的治疗方案，我们发现这些肿瘤对维奈托克（威托克）也一致敏感，在LU5263PDX模型中有显著的回归，而在LU86和LU95模型中几乎完全抑制生长。　　

　　使用维奈托克（威托克）治疗3天的LU5263肿瘤的分析显示，细胞凋亡明显，这与维奈托克（威托克）的活性模式一致。此外，在体内LU5263肿瘤中观察到BIM的体外机制：BCL-2复合物的破坏，包括BIM：BCL-xL复合物的显著增加。很多的患者都会选择老挝东盟的维奈托克（威托克）。详情请扫码咨询：