所有组的均接受以下腹膜内治疗：奥拉帕尼（奥拉帕利）。在24小时方案中，动物接受了两剂奥拉帕尼，在CLP之后的前30分钟和CLP之后的第二8小时，实验在24小时后终止。在生存方案中，在CLP后30分钟开始使用PARP抑制剂治疗，在CLP后8小时进行第二次给药，随后每8小时重复一次相同的给药。监测动物48小时，在该时间点终止实验。从脓毒症小鼠中收集全血样品，置于肝素锂试管中，并立即进行处理以测定丙氨酸，磷，钾，钠（Na +），总胆红素，总蛋白（TP ）和尿素氮（BUN），使用VetScan化学分析仪系统，通过半定量长扩增子PCR分析法（LA-PCR）分析了核和线粒体DNA的完整性，该完整性是通过DNA损伤的相对量来测量的，使用LongAmp Taq DNA聚合酶在组织匀浆中进行描述。
使用DNase血液和组织试剂盒分离总DNA。简而言之，通过使用荧光染料对10kb核特异性DNA片段的PCR扩增进行定量，以检测扩增的双链DNA，来评估对核DNA的破坏。通过使用PicoGreen染色定量9kb线粒体特异性DNA片段的PCR扩增来评估线粒体DNA的损伤。通过对221bp线粒体基因组特异性片段进行二次PCR扩增对数据进行标准化，以校正线粒体DNA的多个副本。 LA-PCR分析的前提是DNA损伤会抑制PCR反应过程中DNA聚合酶的进程，因此适当的DNA片段的扩增与DNA损伤的水平呈负相关。
将血液在无菌盐水中连续稀释。将脾脏在无菌盐水中以100mg组织/ml的浓度匀浆，然后连续稀释。将50微升的每种稀释液铺板并在LB琼脂平板上于37℃培养。温育16小时后，计数细菌菌落的数量，并表示为每毫升血液的CFU或每毫克或克组织的CFU。在体外卫星实验中，我们评估了奥拉帕尼是否对细菌生长有直接影响。在这些实验中，将DH5α大肠杆菌在液体LB生长培养基中于37°C和200RPM的振荡培养箱中在各种浓度（1-100μM）的奥拉帕尼存在下培养。在5小时内在OD600下测量培养物密度。
在体内卫星实验中，我们评估了在没有败血症性休克的情况下奥拉帕尼是否对体内细菌清除有直接影响。从杰克逊实验室获得雄性C57BL6小鼠。给动物（在接种后30分钟和8小时用奥拉帕尼10mg / kg治疗，或用相应的媒介物对照治疗）3.×108 CFUDH5αE.p.感染后20小时收集组织。如上所述定量血液，脾脏和肝脏中的CFU。
在室温下，将组织在甲醛缓冲液（PBS中10％）中固定1周，用分级乙醇脱水并包埋在Paraplast中。将组织切片（厚度：7μm）用苏木精/曙红染色的二甲苯脱蜡，并使用光学显微镜进行研究。以盲法评估玻片。为了通过脾细胞和血液样品的流式细胞术对细胞进行表型表征，我们进行了三组试验：T细胞，Treg细胞（第2组）和Th17细胞。
制备细胞悬浮液，并将其重悬于流式细胞仪缓冲液中。在4°C的黑暗环境下，将细胞用抗CD3，CD4和CD8，抗CD4，CD25和抗CD4抗体染色30分钟，然后用流动液洗涤两次细胞计数缓冲液。对于第1组，收集细胞并通过流式细胞术分析。此外，使用针对CD11b，CD19和Ly6G的抗体对巨噬细胞，B细胞和嗜中性粒细胞进行了类似的分析。对于第2组和第3组，将被表面标记物染色的细胞固定并用的Kit进行透化，然后与抗Foxp3和抗RORγ，IL-17A和IL-17F（第3组）抗体一起孵育在4°C下黑暗中放置30分钟。然后洗涤细胞并通过流式细胞仪分析。现在奥拉帕尼的购买途径还是比较多的，多少价格？有没有便宜的版本？更多详情可咨询下方微信。
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