索拉非尼/多吉美和其他药物联合杀死癌细胞

　　索拉非尼和伏立诺司他相互作用杀死胰腺癌细胞。这种药物联合与胰腺癌治疗性吉西他滨相互作用，导致更大程度的肿瘤细胞死亡。与我们先前在肝癌细胞中的数据不同，beclin1或atg5降低[索拉非尼+vorinostat]致死性。基于我们的细胞杀伤数据，我们接下来探讨了药物暴露后细胞存活和自噬调节蛋白的功能或表达是否发生了变化。[索拉非尼+vorinostat]处理胰腺癌细胞可迅速降低bcl-xl和mcl-1的表达，并增强beclin1的表达。同时，mtorc1(s2448)和mtorc2(s2481)的磷酸化程度降低，eif2s51的磷酸化程度增加。我们组的多项研究已经证明使用分子工具降低eif2功能是导致bcl-xl和mcl-1水平迅速降低和beclin1表达增加的原因。与beclin1失活和表达增加相一致，在[索拉非尼+vorinostat]暴露后4h，gfp+自噬体的数量增加。接触后8小时，rfp+囊泡数量增加，表明自溶体形成，而gfp+囊泡数量下降。这些数据表明，自噬通量的发生。

　　细胞内-catenin的表达受“-catenindestructioncomplex”的形成调节，其中-catenin最终通过蛋白酶体被泛素化并降解。为了进行降解,-连环素也必须被糖原合成酶激酶(gsk3)磷酸化。Gsk3被akt磷酸化，这导致gsk3失活，在胰岛素信号传导的情况下，导致糖原合成酶活性的增加。我们之前已经注意到，在动物饥饿和给予胰岛素和普萘洛尔后，胰岛素可以调节兔骨骼肌中gsk3的活性(未发表的数据)。用[索拉非尼+vorinostat]处理胰腺癌细胞降低了-in的表达，frizzled，erbb1和k-ras，并且联合使用可以降低aktt308，akts473和g3s9/s21的磷酸化。Hdac表达的变化和其他蛋白水平的变化与k-ras表达减少和eif2s51磷酸化增强相关。Gsk3的去磷酸化和活化与-catenin的表达减少有关。低水平的-catenin，erbb1和k-ras可以预测肿瘤生长和存活率的降低。[索拉非尼+vorinostat]治疗panc1和miapaca2人胰腺癌细胞可显著降低pd-l1、odc和ido-1的表达。联合用药显著增强了mhca的表达。细胞暴露于吉西他滨引起了生物标志物表达的类似变化，除了吉西他滨增加了ido-1的表达。Ido-1表达的升高预示着免疫反应的减弱。在pan02鼠胰腺癌细胞系中也获得了类似的数据。

　　[索拉非尼+vorinostat]对小鼠胰腺癌细胞的治疗也显著降低了多种hdac蛋白的表达。Beclin1或atg5的降解阻止了hdac蛋白水平的降低，正如我们之前注意到的其他药物组合。然而，hdacs1-3的降解不是被beclin1的降解阻断，而是被atg5的降解阻断。基于图5(a)中的数据，我们进行了研究，将hdac表达的变化与免疫治疗生物标志物表达的变化联系起来。[索拉非尼+vorinostat]增加了atg5、beclin1和mhca的表达，并降低了erbb1、ido-1、pd-l1、pd-l2、mcl-1、odc和bcl-xl的表达。Hdac2或hdac3基因敲除的现象概括了药物暴露对atg5、beclin1、pd-l1、pd-l2、mcl-1、mhca、odc和bcl-xl表达的影响。Hdac1基因敲除降低了erbb1和pd-l1的表达。因此，[索拉非尼+vorinostat]调节胰腺癌细胞活力和免疫原性的部分分子机制很可能是通过抑制和减少组蛋白脱乙酰酶蛋白的表达。

　　我们接下来进行动物实验，以证明或驳斥体外观察到的生物标志物变化，是否与体内抗肿瘤免疫治疗反应的提高有关。肿瘤生长抑制指数为(1-(治疗肿瘤平均体积)/(对照肿瘤平均体积)x100%。抗pd-1抗体的输注对pan02肿瘤的生长没有明显影响，与vehicle+anti-pd-1的804%相比，vehicle+igg的24天增加了849%。三天暴露于[索拉非尼+伏立诺司他]可显著减少肿瘤的生长，肿瘤控制率为1.75。联合用药加抗pd-1抗体治疗的动物，肿瘤生长进一步明显减缓，肿瘤控制率为4.00(p<0.05)，即[索拉非尼+vorinostat]+igg后肿瘤生长547%，[索拉非尼+vorinostat]+anti-pd-1后肿瘤生长242%。在任何治疗条件下，动物体重均无明显变化。然后，我们在第24天，即停止接触任何药物/抗体后的20天，对从动物身上分离出的肿瘤进行分析。

　　治疗结束后20天，pan02肿瘤细胞突变的k-ras表达减少，erbb1表达减少。在先前接触[索拉非尼+vorinostat]的肿瘤中，ido-1的表达也明显降低，而先前接触抗pd-1抗体的肿瘤中ido-1的水平增加。在所有处理条件下，erk2的总表达量保持不变。先前暴露于[索拉非尼+vorinostat]的pan02肿瘤没有显著改变cd4+t细胞水平，而cd8+t细胞水平强烈增强，药物联合抗pd-1抗体显著增加cd8+细胞水平超过单独治疗。与t细胞水平的改变相平行，[索拉非尼+vorinostat]，正如之前在体外观察到的那样，降低了pd-l1的表达，提高了mhca的水平。生物标志物表达和免疫细胞侵袭的变化与抗pd-1抗体联合[索拉非尼+伏立诺司他]的抗肿瘤效力增强有关。

　　m2极化的巨噬细胞通常产生高水平的il-10和tgf-β，低水平的il-12，而m1极化的巨噬细胞产生低水平的il-10和高水平的il-12。[索拉非尼+伏立诺司他]暴露于pan02肿瘤可降低肿瘤和免疫细胞浸润中il-10和tgf的水平，并且这些效应通过加入抗pd-1抗体而得到加强。相比之下，之前的肿瘤暴露于[索拉非尼+伏立诺司他]显著增强了肿瘤和免疫细胞浸润中的il-12水平。然后我们确定之前[索拉非尼+伏立诺司他]暴露是否改变了内质网应激信号和伴侣功能/表达的基础水平。分子伴侣hsp90的活性受乙酰化调节，部分受组蛋白脱乙酰酶6(hdac6)调节。预先暴露于[索拉非尼+伏立诺司他]的肿瘤中，hdac6的蛋白水平降低了60%以上，eif2s51的磷酸化水平升高了40%以上。尽管eif2磷酸化增强，但grp78在接触[索拉非尼+vorinostat]或抗pd-1抗体的肿瘤或免疫细胞中的表达并未减少。但是，在接触[索拉非尼+vorinostat]抗pd-1抗体的肿瘤中，hsp90的表达明显减少。

　　肿瘤暴露于[索拉非尼+伏立诺他]增加了肿瘤内f4/80+染色细胞的水平。药物组合还增加了inos和精氨酸酶的水平，前者是m1极化标记物，后者是m2极化标记物。然而，虽然f4/80和inos共定位，表明m1巨噬细胞侵袭，f4/80和精氨酸酶没有共定位。在胰腺癌细胞内高水平的精氨酸酶表达是有毒的，是否精氨酸酶的过度表达是由于[索拉非尼+伏立诺他]治疗引起的体内肿瘤细胞的杀伤需要超出本文的研究范围。虽然inos水平升高，但精氨酸酶水平明显低于基线水平。因此，我们的新药/抗体组合促进了肿瘤m1巨噬细胞的浸润，这进一步支持了我们的假设，[索拉非尼+伏立诺司他]代表了一种新的药物组合，使“冷”的胰腺肿瘤“热”此外，观察到的细胞因子表达的变化也与药物治疗的pan02肿瘤中f4/80+inos+m1巨噬细胞浸润增强的数据一致。

　　预先暴露于[索拉非尼+vorinostat]的肿瘤增加了肿瘤中心和前沿cd69+cd335+共染活性自然杀伤细胞的数量。暴露在联合药物和抗pd-1抗体的作用下，导致了肿瘤内nk细胞水平的进一步升高。我们接下来决定我们的药物组合，在有或没有抗pd-1抗体的情况下，是否改变了髓样来源抑制细胞(mdscs)的肿瘤水平。早期暴露于[索拉非尼+伏立诺司他]可增强肿瘤中cd11b染色水平，但减少gr-1染色。最后，对动物血浆和肿瘤组织进行了多重抗体芯片分析。

　　对于大多数细胞因子的分析，基于使用相同数量的血浆/肿瘤蛋白，组织和血浆中的细胞因子水平相似，除了在肿瘤组织中升高的il-16，ccl12和ccl3。与载体控制加igg治疗的肿瘤细胞因子水平相比，接触[索拉非尼+vorinostat]+anti-pd-1的肿瘤细胞cxcl-13、ccl27、cxcl-5、ccl11、kc、g-csf、gm-csf、干扰素、il-1、il-1、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-10、il-13、cxcl10、cxcl7、ccl22、ccl4、ccl5、cxcl-16、c17、ccl25和tnf水平降低。在药物暴露的肿瘤中il-12p40和il-12p70水平升高。血浆中cxcl-13、cxcl-5、il-16、ccl7、cxcl-16和cxcl-12水平升高。血浆细胞因子水平没有明显下降。康安途目前可以为患者提供老挝和印度的索拉非尼（多吉美），价格有很大的优势，怎么购买呢？详情请扫码咨询：