索拉非尼/多吉美抑制肝癌细胞生长

　　在HCC中已经证明，M2巨噬细胞可以通过产生IL-1的广角蛋白和HGF47来改善EMT肿瘤转移，而M1巨噬细胞通过不同的整合素-rhoGTPase-Hippo途径来抑制肿瘤转移。有趣的是，最近有报道称索拉非尼（多吉美）在原位小鼠模型中通过JAK-STAT3信号通路下调HTATIP2的表达，从而诱导EMT并促进肝癌细胞的侵袭和转移。

　　我们研究了TAMs在肝癌索拉非尼（多吉美）耐药中的作用。为此，我们首先使用人单细胞细胞系THP-1，通过PMA分化细胞建立M1巨噬细胞和M2巨噬细胞模型，然后分别用LPS+IFN-转染或IL-4+IL-13极化分化的巨噬细胞。36个形态学表型、基因表达基因型和巨噬细胞标记物表达的鉴定表明，thp-1来源的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞在多个方面分别与肿瘤相关的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞相似。将HCC细胞(SMMC7721、Hep3B、Sk-Hep1)与THP-1CM共培养，M1巨噬细胞不影响肿瘤细胞的增殖和集落形成，而M2巨噬细胞显著促进了肿瘤细胞的增殖和集落形成。索拉非尼（多吉美）能明显抑制肝癌细胞的生长、集落形成和迁移。有趣的是，M2-cm显著降低了索拉非尼（多吉美）抑制肝癌细胞生长、集落形成和迁移的能力，而M1-cm则没有这种作用，提示M2而不是M1通过分泌可溶性因子促进了肝癌中索拉非尼（多吉美）的耐药。

　　已知TAMs产生多种因素，其中一些如CCL22和IGF-1可能导致索拉非尼（多吉美）耐药。通过对M1巨噬细胞和M2巨噬细胞基因表达差异的筛选，我们发现M2巨噬细胞大量表达HGF，并且比M1巨噬细胞多表达约30倍HGF。用重组人HGF替代M2-CM可减轻索拉非尼（多吉美）抑制肝癌细胞生长、集落形成和迁移的能力。在M2-cm上加入抗HGF可以抑制M2-cm对索拉非尼（多吉美）的作用，这表明M2-cm中的HGF在维持肿瘤生长和转移的M2巨噬细胞对索拉非尼（多吉美）的肝癌抵抗中发挥了主要作用。除了肿瘤相关的M2巨噬细胞，癌症相关的成纤维细胞和肝癌细胞也产生大量的HGF，这可能有助于获得索拉非尼（多吉美）耐药。为了进一步探讨其机制，我们评估了肝癌细胞中HGF/c-Met、ERK/MAPK和PI3K/AKT通路关键蛋白的表达和磷酸化情况。

　　我们发现索拉非尼（多吉美）并没有显着影响的蛋白质表达c-Met，ERK1/2和AKTpMet的磷酸化，但显著降低了活跃的磷酸化/1/2和pAKT，证实索拉非尼（多吉美）的作用抑制ERK1/2/MAPK途径针对RAF，11M2-CM或重组HGF与索拉非尼（多吉美）显著增加c-Met的表达和pMet的磷酸化，pERK1/2，pAKT；在M2-CM与索拉非尼（多吉美）结合时加入抗hgf抗体，其效果与单独索拉非尼（多吉美）相同。综上所述，结果表明(a)索拉非尼（多吉美）本身并不影响HGF/c-Met信号，而是通过靶向RAF抑制ERK1/2/MAPK信号，并通过ERK1/2/MAPK途径或其他机制抑制PI3K/AKT信号；(b)M2巨噬细胞分泌的HGF激活HGF/c-Met信号通路以及下游的ERK1/2/MAPK和PI3K/AKT通路。的确，PI3K被证明参与了hcc的索拉非尼（多吉美）耐药。

　　在这项研究中，我们将展示HGF促进肝癌细胞和M2巨噬细胞的迁移，表明HGF分泌肿瘤M2巨噬细胞可能招募更多的巨噬细胞进入肿瘤，调节M2巨噬细胞在肿瘤组织内的分布，从而提高肿瘤前馈方式抵抗索拉非尼（多吉美）。我们进一步开发了裸鼠肝癌细胞传代、索拉非尼（多吉美）诱导治疗小鼠、小鼠传代肿瘤细胞植入小鼠的移植抗索拉非尼（多吉美）和索拉非尼（多吉美）敏感模型。

　　我们发现SR肿瘤中F4/80+/CD206+双阳性M2巨噬细胞明显高于SS肿瘤。短期索拉非尼（多吉美）处理降低了F4/80+/CD206+M2巨噬细胞的数量，而长期暴露索拉非尼（多吉美）则增加了HGF的合成和分泌，同时增加了c-Met和pMet的水平。由于索拉非尼（多吉美）也是一种抗血管生成药物，其抗肿瘤作用可能与抗血管生成活性、肿瘤外不良反应、甚至某些情况下肿瘤转移有关。我们通过CD31染色检查SR和SS肿瘤的血管系统。内皮密度在SR肿瘤和SS肿瘤之间没有显著差异，但是SR肿瘤比SS肿瘤存在更多的大血管，提示这些大血管可能也促进了索拉非尼（多吉美）耐药。

　　在HCC临床样本中，我们注意到CD206+M2巨噬细胞在癌周区域大量积聚，其中有49个细胞c-Met高表达。多变量分析中c-Met表达升高与生存差独立相关。重要的是，最近对关键的索拉非尼（多吉美）III期试验样本的生物标志物分析显示，治疗前血浆HGF浓度较低的患者生存率有提高的趋势，突出了肿瘤相关M2巨噬细胞和HGF在肿瘤对索拉非尼（多吉美）反应中的临床重要性。Cabozantinib，另一个多激酶抑制剂c-Met最有效的抑制，最近被证明改善总体生存中值从8.0到10.2个月作为第二线代理天体HCC.61的III期试验一起，我们假定索拉非尼（多吉美）的组合Cabozantinib将可能改善第一行系统性治疗效果。

　　总之，我们证明肿瘤相关的M2巨噬细胞而不是M1巨噬细胞增加了肝癌细胞的生长和迁移，通过分泌HGF使肝癌对索拉非尼（多吉美）治疗产生耐药性。M2巨噬细胞的HGF和肿瘤细胞激活肿瘤细胞中的HGF/c-Met、MAPK/ERK1/2和PI3K/AKT通路，从周围血液循环中吸收更多巨噬细胞，调节M2巨噬细胞在肿瘤组织中的分布，并以前馈方式增加肿瘤对索拉非尼（多吉美）的抗性。我们的研究结果为索拉非尼（多吉美）在HCC中的耐药性提供了新的见解，并提倡开展一线系统治疗的新试验，将索拉非尼（多吉美）与强效HGF抑制剂cabozantinib联合使用，以提高一线系统治疗的疗效。索拉非尼（多吉美）哪儿的便宜些呢？可以通过康安途购买印度的仿制药。详情请扫码咨询：