怎么提高曲美替尼trametinib在NRASmut黑色素瘤中的有效性

　　除了随机化学筛选外，基于结构的药物重新定位现在是快速开发药物的可行途径。蛋白质化学计量学方法与激酶测定相结合表明，甲苯达唑（MBZ）结合并抑制对癌症重要的激酶，尤其是BRAFWT和BRAFV600E。我们发现MBZ与MEK抑制剂曲美替尼协同作用以抑制BRAFWT-NRASQ61K的生长黑色素瘤细胞在培养物中和异种移植物中均显着降低，MEK和ERK磷酸化降低。　　

　　反相蛋白质阵列（RPPA）和免疫印迹分析表明曲美替尼和MBZ均抑制MAPK途径，聚类分析显示蛋白簇显示强MBZ+曲美替尼在10分钟内抑制MEK和ERK的磷酸化，以及其直接和间接下游与压力反应和翻译有关的目标，包括30分钟内的ElK1和RSK。细胞周期的下游ERK靶标（包括cMYC）被下调，与MBZ+trametinib的S期抑制相一致，而凋亡的标志物（包括裂解的caspase-3，裂解的PARP和sub-G1群体）均随时间增加。这些数据表明，MBZ是一种耐受良好的非专利批准药物，Q61mut或其他非V600EBRAF突变型黑色素瘤。　　

　　靶向治疗的范式，一种药物的一种靶标的疾病方法，存在包括耐药性发展在内的问题，因此，需要一种靶向新扩增或突变的蛋白质的新疗法。随着癌症通过多种途径发展，仅靶向一种途径通常是不够的。因此，已经提倡联合靶向疗法作为一种使用多靶点抑制剂或单靶点药物联合治疗癌症的新方法。因此，混杂抑制剂如索拉非尼和舒尼替尼可有效破坏细胞信号通路中的多个结节。但是，由于这些药物可能会产生不可接受的副作用，因此剂量滴定是有问题的。用于新药发现的最新技术部分旨在规避这些挑战，尽管2014年引入的新分子实体的数量有所增加，但是药物开发的趋势却是可变的。一种替代方法是利用现有药物并将其重新用于其他适应症。　　

　　便宜的咀嚼型驱虫药Mebendazole（MBZ；N-[6-（苯甲酰基）-1H-苯并咪唑-2-甲基]氨基甲酸甲酯）自1970年代初以来已被广泛使用，即使给药也无毒。高剂量。MBZ作用于微管蛋白的蛔虫的秋水仙素结合位点，并破坏其聚合。MBZ不会引起其他抗微管药物的副作用，包括紫杉烷类和长春花生物碱。　　

　　MBZ和其他苯并咪唑氨基甲酸酯（如阿苯达唑）的微管破坏特性激发了人们对这些药物作为抗癌药的兴趣。MBZ抑制有丝分裂纺锤体，诱导G2/M阻滞和细胞凋亡在人肺癌细胞，并抑制它们的形成肿瘤在裸鼠体内能力，而不会宿主毒性。然而，MBZ对人微管蛋白的亲和力比round虫微管蛋白的亲和力低得多，并且循环的MBZ水平不可能达到足以在体内阻断人微管蛋白的水平。　　

　　除靶向微管蛋白外，我们实验室和其他机构的研究表明，MBZ分别在3600nM，820nM和660nM时抑制VEGFR-2，PDGFRA和PDGFRB。MBZ可在体内外抑制黑色素瘤细胞系的生长，并伴随微管蛋白聚合，BCL2磷酸化和凋亡的改变。尽管目前正在进行MBZ治疗神经胶质瘤的两项临床试验，但针对转移性肾上腺皮质癌或转移性结肠癌患者的两例病例报告凸显了临床获益的证据。　　

　　在前一种情况下，观察到转移性病变有所消退，并且在MBZ单药治疗中癌症保持稳定，患者耐受治疗直至24个月进展。在后一种情况下，观察到肺和淋巴结转移灶几乎完全消退，肝脏部分消退。在报告的个人通讯中，另外五名患者接受MBZ治疗，包括一名经历了轻微肿瘤反应的患者。　

　　当前的癌症疗法集中于靶向驱动突变，包括致癌的BRAF和NRAS，其在黑素瘤中很常见。在分别有46％和9％的黑色素瘤中发现了BRAFV600E和BRAFV600K。此外，以前被归类为“BRAFWT”的黑色素瘤中有10％实际上在BRAF中具有非V600E/K突变。　　

　　实际上，已经鉴定出与人类癌症相关的BRAF基因的30多个突变，其中许多可能对曲美替尼敏感，因为这些突变显示出MEK1/2的刺激失控。对靶向治疗达拉非尼（GSK2118436a;BRAFV600E/K抑制剂和/或曲美替尼与其他突变的发生有关，包括激活NRAS的突变。带有NRASmut/BRAFWT信号的黑色素瘤患者（约占患者的21％）的治疗选择有限，并且对当前的靶向治疗无效。　　

　　在当前的研究中，我们报道了MBZ和曲美替尼的组合抑制了患者携带NRASmut/BRAFWT的黑色素瘤细胞系的增殖如基因测序所确定的那样，并显着减弱了免疫受损小鼠异种移植物中它们的生长。基于反相蛋白阵列（RPPA）的蛋白途径激活图谱和免疫印迹分析表明，在药物治疗后10分钟内，MBZ或曲美替尼单独或联合使用对MAPK途径具有特异性抑制作用，并且通过MBZ或曲美替尼进行下游调节。　　

　　在随后的时间点，MBZ+曲美替尼诱导凋亡的标志物，包括caspase-3的蛋白水解激活和PARP裂解，通过荧光测定法检测到的caspase活性增加以及凋亡的亚G1细胞水平增加。在暴露于曲美替尼（24h）或曲美替尼+MBZ（8h）的细胞中，也观察到S期细胞减少，同时G2增加24h，G1增加48h。因此，MBZ的WT，导致ERK活动以及ERK下游目标的组合快速关闭。因此，MBZ是一种可行的无毒选择，可用于提高曲美替尼trametinib在NRASmut/BRAFWT黑色素瘤中的有效性。详情请扫码咨询：