赛可瑞/克唑替尼的抗胰腺癌肿瘤活性

　　克唑替尼/赛可瑞（c-MET / ALK抑制剂）在不同类型的癌症中均表现出抗肿瘤功效。然而，关于克唑替尼在胰腺癌中的研究是有限的。因此，我们研究了克唑替尼对胰腺癌的作用及其作用机制。克唑替尼以剂量依赖性方式强烈抑制胰腺癌细胞的生长和增殖。而且，它通过调节其相关因子来诱导细胞凋亡。在该研究中，就作用机理而言，克唑替尼不抑制胰腺癌细胞上c-MET的表达。相反，它特异性地抑制了ALK的活性，ALK的活性在我们的研究中已在各种胰腺癌细胞和组织中得到了高度表达。在42种不同的受体酪氨酸激酶（RTK）阵列中，克唑替尼还强烈抑制胰腺癌细胞中活化的ALK的表达，从而调节其下游介质，如STAT3，AKT和ERK。

　　此外，克唑替尼在小鼠基质胶栓塞试验中抑制了血管生成，并在小鼠异种移植模型中抑制了肿瘤的生长。综上所述，我们的研究表明克唑替尼在胰腺癌中抑制ALK信号通路，从而导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可以用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。我们的研究表明，克唑替尼在胰腺癌中抑制ALK信号通路，从而导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可以用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。我们的研究表明，克唑替尼在胰腺癌中抑制ALK信号通路，从而导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可以用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。

　　克唑替尼抑制胰腺癌细胞的生长和增殖

　　为了评估克唑替尼对胰腺癌细胞（AsPC-1，PANC-1和MIA PaCa-2）的生长和增殖的影响，我们使用了MTT分析和BrdU染色。MTT分析的结果表明，克唑替尼以剂量依赖性方式抑制胰腺癌细胞的生长48小时和72小时，在胰腺细胞系中IC50值接近5μM。使用BrdU染色6小时，我们还发现克唑替尼以剂量依赖的方式抑制了PANC-1细胞的增殖（图2）。

　　克唑替尼诱导胰腺癌细胞凋亡

　　为了进一步了解克唑替尼是否在胰腺癌细胞中诱导凋亡，我们在PANC-1细胞中进行了TUNEL分析，JC-1染色，MitoTracker探针和western印迹。通过TUNEL染色观察到，在克唑替尼处理后检测到DNA片段。在细胞凋亡期间，线粒体中发生了几个关键事件，包括细胞色素c的释放，电子传递的变化以及线粒体跨膜电位的丧失。从大多数细胞中红色荧光的消失或绿色荧光的增加可以明显看出，线粒体跨膜电位发生了明显变化。与上述结果一致，线粒体跨膜电位的变化诱导了细胞色素c向细胞质的释放。此外，克唑替尼提高了裂解的caspase-3和PARP的表达水平以及Bax的表达。相反，克唑替尼降低了Bcl-2的表达水平。

　　克唑替尼不抑制胰腺癌细胞c-MET的磷酸化

　　据报道，c-MET在多种癌中高表达，包括肺癌，乳腺癌，结肠癌和胰腺癌。包括克唑替尼和卡波替尼在内的c-MET抑制剂增强了吉西他滨在胰腺癌中的抗肿瘤作用。此外，克里唑替尼作为c-Met的抑制剂显示出通过抑制c-Met的肺癌和胃癌细胞发挥抗肿瘤效果。因此，我们鉴定了c-MET在胰腺癌中的表达，然后研究了Crizotinib是否抑制了胰腺癌细胞中c-MET的磷酸化。c-MET和pc-MET在胰腺癌细胞系中高表达。当用克唑替尼以剂量依赖性方式处理胰腺癌细胞时，它不会同时抑制pc-MET和c-MET的表达。

　　克唑替尼/赛可瑞的另一种抗癌作用可能是抑制血管生成。血管生成是新血管从预先存在的结构出芽的过程中，发生在实体瘤，包括胰腺癌的生长和进展。另外，靶向血管生成为胰腺癌提供了新的预后和治疗方法。最近，克唑替尼的抗肿瘤研究表明，微血管密度以剂量依赖性方式降低（CD31）。与他们的结果一致，我们的研究表明克唑替尼在Matrigel塞栓试验中明显抑制了新血管的形成，并降低了CD31的表达，表明克唑替尼是一种潜在的抗血管生成剂。

　　总之，我们证明了克唑替尼/赛可瑞通过下调ALK信号通路而不是胰腺癌中的c-MET抑制肿瘤生长和血管生成并诱导凋亡。我们对克唑替尼这种新的抗癌机制的发现可能对靶向ALK的胰腺癌新药有用。微信扫描下方二维码了解更多：