曲美替尼(trametinib)的敏感性

　　尽管最近在靶向治疗转移性黑色素瘤方面取得了进展，但BRAF和NRAS野生型肿瘤患者的选择仍然有限。BRAF/NRAS野生型黑色素瘤占所有黑色素瘤病例的13-26%，通常表现为高C > T突变负担，功能缺失突变和NF1缺失，以及KIT激活突变。在本病中也观察到试剂盒、CCND1和TERT的扩增。达卡巴嗪化疗是治疗这种分子级别黑色素瘤患者的标准治疗，但晚期疾病的应答率令人失望。最近，免疫疗法已应用于该疾病，在部分患者中产生显著反应，但大多数患者的生存期仅比化疗有所改善。在携带试剂盒突变的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者中，试剂盒抑制剂显示了一些疗效，特别是在外显子11或13突变的患者。然而，这种治疗方式仅适用于10-22%的试剂盒突变型BRAF/NRAS野生型疾病患者。总的来说，转移性BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者的存活率仍然令人沮丧。

　　曲美替尼（trametinib），一种竞争性的MEK1/2抑制剂，单独或联合BRAF抑制剂治疗显著提高了BRAF突变黑色素瘤患者的生存率。此外，一些NRAS突变型疾病患者对MEK抑制剂治疗有反应。虽然在曲美替尼的1期临床试验中，BRAF/NRAS野生型黑色素瘤患者出现了部分反应，但该疗法的有效性在这一亚类疾病中尚未得到充分探讨。最近，Nissan等人发现在BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞株中，曲美替尼有效地抑制了细胞生长和ERK信号传递，这些细胞株失去了RAS信号的负调控因子NF1。As 56-76%的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤不携带NF1功能突变的丢失，我们研究了保留NF1表达的细胞株对曲美替尼的敏感性。

　　我们收集了25个患者来源的黑色素瘤细胞系，并确定了19个黑色素瘤癌症基因的突变状态。我们的收集包括9个携带BRAF激活突变的细胞系和16个BRAF/NRAS野生型细胞系。在暴露于9种不同剂量的曲美替尼(范围0.08-10 nM) 6天后，用Syto60(一种基于核酸的检测方法)评估每个细胞系对曲美替尼的敏感性。

　　该试验提供了对细胞活力的可靠估计，并与活细胞试验一致(见图S1和数据S1)。所有BRAF /国家管制当局方面野生型黑色素瘤行显示的IC50 trametinib摩尔范围,这相当的IC50 BRAF-mutated并行测试的细胞系。与筛选的316个曲美替尼敏感性癌细胞株的IC50相比，BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞株被评分为高度敏感，这表明MAPK通路的利用是这些黑色素瘤的一个内在特征。这些结果证实并扩展了最近一项研究的有效性，该研究表明BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞株对曲美替尼敏感，并表明它们对MEK抑制的敏感性不亚于BRAF突变黑色素瘤。

　　为了进一步分层我们收集的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤，我们通过Western blotting和测序评估NF1状态。Western blotting分析的16株BRAF/NRAS野生型细胞株中，有9株显示出无法检测到的NF1蛋白水平，而7株表达了NF1蛋白。值得注意的是，7株表达NF1蛋白的BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞株对曲美替尼的敏感性与无法检测到NF1蛋白的细胞株相似(对于NF1阳性和NF1阴性的黑色素瘤，IC50分别为1.81 nM±1.20和3.10 nM±1.22;双尾无配对t检验P = 0.47;图Figure1C1C和Table表1).1)。为了证实曲美替尼对不同NF1表达状态的细胞系抑制MEK的有效性，我们检测了MAPK通路下游效应因子phospho-ERK的水平。升高剂量的曲美替尼(0.01 - 10nm)的处理显示，在所有检测的细胞系中，1 nM和10nm的曲美替尼磷酸化erk水平降低。然后我们测量了ERK下游转录靶点:ETV5和PHLDA1的表达水平。曲美替尼分别诱导3/4细胞株ETV5和4/4细胞株PHLDA1水平显著降低。

　　总之，这些结果表明，曲美替尼（trametinib）诱导BRAF/NRAS野生型黑色素瘤细胞株中ERK通路的功能性下调，表达NF1蛋白的细胞株也可被定义为对MEK抑制敏感。微信扫描下方二维码了解更多：