为了深入研究帕唑帕尼和曲美替尼（mekinist）联合活性背后的分子机制，我们对三种骨肉瘤细胞系（HOS，MNNG / HOS，U-2 OS）上380 MAPK和PI3K途径相关基因的转录修饰进行了高通量筛选）与NanoString®的nCounter技术。在所有测试的细胞系中，与未处理的对照组（p<0.0001）和经曲美替尼处理的细胞（p<0.0001）相比，帕唑帕尼和曲美替尼的组合显着诱导了MEK6基因的表达（对数倍变化= 2.90±0.51）。此外，与未处理的对照组（p<0.01）和帕唑帕尼处理的细胞（p<0.05）相比，该药物组合显着降低了EphA2基因的表达（对数倍变化= -2.02±0.50）。与未处理的对照组（p<0.01）和经曲美替尼处理的细胞（p<0.05）。
为了验证这些发现，我们在用帕唑帕尼（10 μM），曲美替尼（25 nM）及其组合治疗24小时后，还在所有七个骨肉瘤细胞系中也在蛋白质水平上检查了MEK6，EphA2和IL7R。与之前的实验一致，我们证明了与未经治疗的对照组相比，两种药物联合使用显着上调了MEK6蛋白的表达（p<0.0001），并下调了EphA2（p<0.0001）和IL-7R（p<0.001）。我们没有观察到p38表达和磷酸化的任何变化。调节MEK6对帕唑帕尼和曲美替尼联合用药的活性
考虑到帕唑帕尼+曲美替尼联合对MEK6的上调作用，我们通过沉默和过表达实验在治疗的骨肉瘤细胞系中验证了其功能作用。作为细胞凋亡的标志，我们在MEK6沉默后搜索了用帕唑帕尼+卡培替尼联合治疗的两种骨肉瘤细胞系（HOS和KHOS / NP）中裂解的PARP-1。药物处理24小时后，与混乱的细胞相比，MEK6沉默显着增加了PARP-1的切割。类似地，在72小时处理后的相对细胞计数显著在MEK6-沉默的细胞降低（p在HOS和<0.01p<0.05在KHOS/NP）。
通过流式细胞术分析也证实了这些结果。具体而言，MEK6在KHOS / NP中的下调显着增强了该组合的促凋亡作用（p<0.05），而在HOS中，与对照组相比，帕唑帕尼+曲美替尼减少了增殖细胞的百分比（G2/ M期），导致人口倍增时间显着增加。我们还探讨了MEK6过表达的影响。有趣的是，MEK6的有效过表达显着降低了帕唑帕尼+卡培替尼联合用药对KHOS / NP细胞的作用。现在曲美替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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