EMT是否与达拉非尼Dabrafenib耐药有关

　　已有报道称，ough黑色素瘤细胞起源于黑色素细胞，而不是上皮细胞，而是起源于神经嵴的神经内分泌细胞，它们能够以类似经典上皮-间充质转化(EMT)的过程，将表型从增生性转换为更具侵袭性的状态。为了研究EMT是否与达拉非尼耐药有关，根据材料和方法，用TGF-β1刺激达拉非尼敏感的黑色素瘤细胞诱导EMT，然后用达拉非尼(5nM)处理细胞。

　　TGF-β1作用48h后，细胞发生EMT，与非TGF-β1诱导的黑色素瘤细胞相比，细胞对达拉非尼更敏感，提示所观察到的耐药性与“经典”TGF-β1诱导的EMT无关。　　

　　为了进一步揭示达拉非尼耐药黑色素瘤细胞的表型特征，我们采用免疫荧光技术检测波形蛋白丝的网络重组。我们发现波形蛋白主要在达拉非尼敏感黑色素瘤细胞的细胞质中检测到，而在达拉非尼耐药细胞中则在核周区域观察到波形蛋白，这与EMT中预期的一致。　　

　　由于E-cadherin的下调被认为是一种真正的经典EMT诱导剂，我们通过RT-PCR检测了E-cadherin在达拉非尼敏感和耐药黑色素瘤细胞中的转录水平，如材料和方法中所述。我们观察到E-cadherin水平在达拉非尼耐药和敏感细胞之间没有变化，这表明EMT与达拉非尼耐药无关。然而，在达拉非尼耐药和敏感的黑素瘤细胞中观察到E-cadherin蛋白分布的变化。特别是，在所有耐药细胞中，E-cadherin从细胞膜转位到细胞质和细胞核，这与EMT中预期的一致。　　

　　此外，对dabrafenib耐药的3种黑色素瘤细胞株中Snail的表达水平没有变化，而Twist的表达在397_B-RAFi(R)比397、624.38_b-rafi(R)比624.38细胞中下降，在A375_B-RAFi(R)比A375细胞中没有变化。　　

　　综上所述，这些数据表明，药物暴露下的黑色素瘤细胞发生了上皮-间充质样表型转变，而这并不是TGF-β1诱导的EMT通路激活的结果。详情请扫码咨询：