对达拉非尼Dabrafenib耐药的黑色素瘤细胞的表型

　　本研究对B-RAF抑制剂dabrafenib耐药的黑色素瘤细胞表型进行了研究，以进一步阐明黑色素瘤对B-RAF抑制的耐药。用3种不同的细胞系A375、397和624.38产生对达拉非尼耐药的黑色素瘤细胞，均携带B-RAFV600E，并通过细胞荧光分析、离子流技术、免疫荧光和生物化学对其进行表征。所有达拉非尼耐药细胞除了重新激活MAPK信号外，与敏感细胞相比，形态学发生变化，伴有CD90(间充质标记物)表达增加和E-cadherin(上皮标记物)表达减少，表明上皮细胞向间充质样表型转变。

　　然而，与非TGF-β1诱导的EMT黑色素瘤细胞相比，TGF-β1诱导的上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymaltransition，EMT)黑色素瘤细胞对达拉非尼治疗更敏感，提示TGF-β1诱导的EMT与达拉非尼耐药无关。　　

　　尽管dabrafenib-resistant细胞表现出增加细胞活性和钙粘蛋白/波形蛋白重组，作为EMT预期，它们显示不变的钙粘蛋白mRNA和不变蜗牛蛋白水平，而Twist1蛋白表达降低除了A375dabrafenib-resistant黑色素瘤细胞，它是未受影响。这些发现表明，药物暴露下的黑色素瘤细胞采用了一种明显活跃的emt样过程。此外，达拉非尼耐药细胞表现出干细胞样特征，Oct4从细胞质转位到核周位置和细胞核，CD20表达增加。　　

　　总之，我们的数据除了证实达拉非尼的耐药依赖于MAPK信号的重新激活外，还表明这种耐药与一种独特的活性emt样过程以及黑色素瘤细胞所采用的干细胞特征有关。　　

　　黑色素瘤是最致命的一种皮肤癌和代表超过75%的皮肤癌症相关死亡。转移性黑色素瘤(MM)是基于传统治疗化疗反应差，导致5年生存率仅为15%。分子改变与日晒有关或DNA甲基化被认定为与黑色素瘤的发展。特别是，已经检测到RAS/RAF/MEK/ERK或丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的基因突变，并为治疗提供了新的靶点。　

　　靶向丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的治疗，利用小分子抑制BRAF和MEK之间的信号传递，对该病的临床结果有效。肿瘤激活BRAF的选择性抑制剂，vemurafenib和dabrafenib，在约50%的患者中显示出主要的肿瘤反应。　　

　　与达卡巴嗪相比，Vemurafenib在死亡和疾病进展风险方面降低了超过三分之二。然而，大多数患者表现出耐药性6-8个月后由于一些耐药机制。尽管这些机制只是部分理解，MAPK复活似乎主要负责获得性耐药，通过b-raf拷贝数增加，异常的b-raf拼接、基因突变或MEK1/2和upregulation受体酪氨酸激酶。　　

　　MM联合B-RAF和MEK抑制剂(分别是达拉非尼加曲美替尼和vemurafenib加cobimetinib)治疗已被用作克服耐药发展的策略。约半数接受达拉非尼/曲美替尼联合治疗的黑色素瘤患者在11-12个月出现耐药性(中位无进展生存期，11个月；中位缓解持续时间为12.9个月)，尽管耐药仍是获得更好疗效的障碍。　　

　　最近，我们使用3d人类黑色素瘤模型证明了B-RAF/MEK/AurkA抑制剂三联治疗对抑制黑色素瘤细胞生长更有效。然而，单一或联合治疗仅对存在于表皮/真皮交界处的多角形黑色素瘤细胞有效，而在真皮层中检测到的梭形黑色素瘤细胞继续存活并增殖。　　

　　在本研究中，我们描述了对达拉非尼耐药的黑色素瘤细胞的表型。为此，我们选择体外黑素瘤细胞抵抗dabrafenib(b-raf抑制剂(B-RAFi))从3个不同dabrafenib-sensitive黑色素瘤细胞系(A375397和624.38)和我们进行一个比较表型研究dabrafenib-resistant和敏感的黑色素瘤细胞，在药物的选择压力下，由于电阻B-RAFV600E抑制黑素瘤是可逆的和自适应。详情请扫码咨询：