曲美替尼Trametinib对血小板功能的负面影响的潜力不明确

　　MEK抑制剂cobimetinib和trametinib目前与BRAF抑制剂联合用于BRAF V600E/K突变转移性黑色素瘤的治疗。在一些临床试验中，cobimetinib或曲美替尼联合BRAF抑制剂达拉非尼与达拉非尼联合安慰剂相比，出血率增加。目前尚不清楚这些事件是否与治疗有关。　　

　　血小板功能障碍与其他激酶抑制剂癌症治疗相关的出血增加有关，如ibrutinib和达沙替尼。血小板表达MAPK信号级联的几个成员，包括MEK1和MEK2及其下游效应因子ERK1和ERK2。然而，MEK信号在调节血小板功能中的作用尚不清楚，已有几篇相互矛盾的报道发表。因此，MEK在调节血小板功能中的作用，以及MEK抑制剂如cobimetinib和曲美替尼对血小板功能的负面影响的潜力仍不明确。　

　　我们调查了MEK抑制剂是否会导致血小板功能障碍，以确定这是否会增加MEK抑制剂治疗期间观察到的出血风险。我们发现，虽然两种MEK抑制剂都是血小板中MEK活性的强有效抑制剂，但cobimetinib抑制了血小板功能的重要标记物;聚集、粘附、整合素激活、α颗粒分泌、磷脂酰丝氨酸暴露、血栓形成，药效较低，曲美替尼几乎没有任何抑制作用。　　

　　我们的研究结果清楚地表明，在MEK活性完全被抑制的情况下，血小板能够正常工作。先前的研究报道了MEK信号在GPIb和ADP受体P2Y1和P2Y12下游的血栓素A2生成中的作用。然而，我们没有观察到MEK抑制剂对vWF的粘附和扩散，也没有观察到流动下血栓形成的影响，流动测试高度依赖于柠檬酸盐血液中vWF和TxA2的生成。我们还观察到MEK对ADP引起的聚集、整合素αIIbβ3的激活或α-颗粒的分泌没有影响。　　

　　试验设计的差异可能会支撑我们的研究和其他研究的差异，但我们主要试图研究MEK抑制对血小板功能的生理学相关影响，但无法确定任何影响。一项关于MEK抑制剂U0126的研究发现，充分抑制ERK1/2磷酸化的U0126浓度不能抑制一系列不同激动剂引起的聚集，而高浓度的聚集抑制是由于对MEK以外的靶标具有活性。　　

　　另一项使用MEK抑制剂PD 98059的研究发现，通过MEK抑制ERK1/2激活并不改变血小板对生理激动剂胶原或凝血酶的反应。我们认为，抑制MEK活性所需的cobimetinib浓度(nM)和抑制血小板功能所需的浓度(μM)之间的差异是由于药物的脱靶效应。这些都很可能与PKC活性有关，要么直接，要么通过催化域关键残基的磷酸化来激活PKC，如PDK-1。　　

　　支持这我们发现磷酸化PDK-1衬底Akt T308 cobimetinib抑制了但不是trametinib supraphysiological浓度,我们还观察到抑制PKC底物磷酸化和聚合后刺激的PKC激活PMA。trametinib有更大的选择性比cobimetinib MEK和唯一MEK-independent信号事件,我们发现被trametinib抑制是一种蛋白激酶的磷酸化S473,作为一种PDK-2和ILK的底物，曲美替尼在其他方面似乎缺乏与cobimetinib观察到的血小板功能或PKC活性脱靶效应。　　

　　据报道，口服cobimetinib的血药浓度约为18 nM，而曲美替尼的血药浓度约为9.7 nM。在体外使用类似浓度的cobimetinib或曲美替尼治疗后，观察到CRP或TRAP-6诱发的ERK1/2 T185/Y187磷酸化，未检测到血小板聚集、整合素激活、α颗粒分泌或胶原蛋白、纤维蛋白原或vWF粘附和扩散的改变。虽然在体外观察到的浓度-效应关系可能不能直接转化为在体内观察到的效应。对血小板功能的影响与MEK抑制之间有足够大的窗口期(约1000倍)，可有效排除cobimetinib或曲美替尼治疗期间急性药物诱导血小板功能障碍。　　

　　作为一个策略来减少耐药性,增加癌症治疗疗效和克服皇家空军悖论,MEK抑制剂结合管理BRAF抑制剂,因此我们认为是很重要的,以确保MEK抑制剂的组合与相应的BRAF抑制剂没有把导致血小板抑制作用在治疗范围内。BRAF曾被报道在血小板中表达，但BRAF在血小板功能中的作用尚未被报道。我们发现，vemurafenib而不是达拉非尼在高浓度的药物相关抑制剂浓度下，对CRP和TRAP-6均抑制血小板功能，而这很可能是由于对Src磷酸化和活性的脱靶抑制。　　

　　总之，我们发现两种MEK抑制剂都能有效抑制ERK磷酸化，而不影响血小板功能。在纳米浓度下，cobimetinib和trametinib抑制剂的高度效价和选择性使我们可以确信，MEK磷酸化ERK对于正常的血小板聚集、粘附、α颗粒分泌或血栓形成不是必需的。虽然cobimetinib能够在高(药理学上)浓度下抑制几种功能性的血小板反应，但这些被发现是由于对血小板下游信号事件的脱靶抑制，包括抑制Akt和PKC活性，这可能是由抑制PDK1引起的。　　

　　对MEK和ERK在血小板中的作用的研究高度依赖于药理学抑制剂，因为KOs缺乏活力，也缺乏允许使用siRNA或其他敲除技术的有核细胞模型。然而，特别是曲美替尼对MEK的特异性高于其他血小板激酶，因此可能就MEK的重要性及其对血小板中ERK1/2的调控提供了迄今为止最明确的答案。　　

　　我们的发现表明，在没有MEK活性的情况下，ERK能够发挥血小板特异性功能，或者在之前的研究中使用药理学抑制剂导致了血小板信号作用的一些错误归属，即MEK介导的ERK1/2激活。然而，在巨核细胞中，ERK1/2调节参与发育和血栓形成基因的表达，ERK信号通路是重要的。其他转录因子，如核受体家族成员，NFƙB, IƙBK和IKKB， STAT3也被发现对血小板功能发挥非基因组效应;然而，由于血小板的无核性质，MEK ERK信号通路可能导致一条死胡同。详情请扫码咨询：