曲美替尼Trametinib没有抑制PKC活性

　　考虑到用MEK抑制剂治疗血小板后缺乏有效的抗血小板作用，我们研究了血小板信号事件，以阐明MEK和其他信号激酶在血小板功能中的作用。我们发现，用1μg/mlCRP或10μMTRAP-6刺激血小板可诱发强大的ERK1/2苏氨酸185和酪氨酸187磷酸化，这是MEK介导的，是ERK1/2激酶活性所必需的。　　

　　用cobimetinib治疗血小板能有效抑制CRP诱发的ERK1/2磷酸化(logIC50=−9.5M±0.53)和TRAP-6(logIC50=−9.5M±0.47)。用曲美替尼治疗后也得到了类似的观察结果，CRP(logIC50=−10.9M±0.43)和TRAP-6(logIC50=−9.6M±0.44)诱发的ERK1/2磷酸化显著减弱。　　

　　我们观察到，cobimetinib和曲美替尼都是血小板MEK活性(nM)的强效抑制剂，而血小板功能(μM)的弱抑制剂，因此我们得出结论，MEK活性的抑制不可能是血小板功能抑制的原因。因此，我们继续研究其他激酶的抑制作用，这些激酶对血小板功能很重要，可能导致血小板功能障碍，观察到在生理上浓度的cobimetinib。　　

　　mTOR和ILK介导S473位点Akt的磷酸化，Akt是PI3K血小板信号传导的下游效应因子，而cobimetinib(logIC50=−8.0M±0.16)和trametinib(logIC50=−8.2M±0.28)显著抑制了该位点的磷酸化。相反，AktT308上的PDK1磷酸化位点被cobimetinib抑制，而曲美替尼没有，而且cobimetinib对T308的抑制作用要比AktS473的抑制作用低得多(logIC50=−5.4M±0.65)。　　

　　我们通过测量PKC底物的总磷酸化来研究PKC活性，发现cobimetinib低效抑制PKC激活(logIC50=−5.3±0.28)，而曲美替尼没有抑制PKC活性。Cobimetinib还可抑制PMA诱导的血小板聚集和PKC底物磷酸化，这强烈提示Cobimetinib可能直接抑制PKC、Akt等丝氨酸/苏氨酸激酶，并通过该机制对血小板功能发挥脱靶作用。　　

　　为了建立cobimetinib如何导致抑制血小板反应，我们比较的效力MEK抑制剂的激酶活性血小板功能的影响。尽管激酶抑制MEK和调解的一种蛋白激酶磷酸化的激酶S473，trametinib和cobimetinib介导这些影响的效力(IC50海里)显著大于他们的力量引起抑制对血小板功能的影响(IC50μM))。　　

　　因此，我们认为抑制ERK1/2T185/Y187和AktS473的作用与所观察到的抑制血小板功能的作用无关。相反，cobimetinib也抑制PKC底物磷酸化和AktT308磷酸化，其效价与抑制血小板功能所需的效价没有显著差异。详情请扫码咨询：