曲美替尼Trametinib没有抑制任何激动剂引起的血小板聚集

　　为了研究MEK抑制剂诱导的血小板功能障碍是否可能导致MEK抑制剂治疗期间观察到的出血发生率增加，我们首先使用高通量微量滴度平板法研究了血小板聚集。洗净的血小板用一定浓度的MEK抑制剂处理，然后用1μg/mlCRP-XL、1μg/ml胶原蛋白、10μMTRAP-6(SFLLRN)、1μMU46619或10μMADP刺激。曲美替尼没有抑制任何激动剂引起的血小板聚集，即使在最高浓度测试(30μM)。相比之下，cobimetinib抑制了所有激动剂引起的聚集，尽管其效度较低，并未能完全消除除CRP外任何激动剂引起的聚集(logIC50=−4.9M±0.02)。　　

　　低浓度的血小板激动剂(0.1和0.3μg/mlCRP-XL和0.1，1μMTRAP-6)指示MEK抑制不仅发生在低浓度的血小板受体激动剂，进一步调查MEK抑制剂的影响血小板聚集的概要文件使用实时传统光透射aggregometry确认没有抑制动力学或血小板聚集程度1μg/mlCRP-XL或1μMTRAP-6cobimetinib或trametinib甚至在最高浓度测试(10μM)。MEK抑制剂对血小板与胶原蛋白、vWF或纤维蛋白原涂层表面粘附的影响也采用基于微量滴定板的方法测定。我们发现曲美替尼和cobimetinib都是对胶原蛋白和vWF粘附的弱抑制剂，但在某些实验中cobimetinib对纤维蛋白原的粘附有较强的抑制作用，但仅在高浓度(≥3μM)时有效。　　

　　IIbcobimetinib的影响和trametinib整合素αβ3激活和α颗粒分泌测定用流式细胞术测定纤维蛋白原绑定和P-selectin曝光，因为这些过程对血小板功能至关重要。作为聚合的观察，我们发现cobimetinib抑制CRP-evoked纤维蛋白原绑定(logIC50=−5.2M±0.17)和P-selectin曝光(logIC50=−5.2M±0.01)但这trametinib没有抑制作用。　

　　同样，TRAP-6的激活被cobimetinib部分抑制，虽然不足以使IC50值的估计成为可能，而且trametinib没有抑制TRAP-6的激活。Cobimetinib还可以抑制u46619诱发的整合素αIIbβ3激活(logIC50=−4.9M±0.09)和p-选择素暴露(logIC50=−5.2M±0.04)，而曲美替尼即使在最高浓度测试中也仅部分抑制这些反应(30μM)。与U46619类似，cobimetinib抑制adp诱发的整合素αIIbβ3激活(logIC50=−5.2M±0.25)和p-选择素暴露(logIC50=−5.1M±0.04)，而曲美替尼在30μM时仅部分抑制。　　

　　暴露磷脂酰丝氨酸(PS)是凝血血小板形成的关键步骤，它支持凝血过程，使血栓形成稳定。用流式细胞术检测cobimetinib和trametinib对AnnexinV结合的影响。我们发现，在没有血小板刺激的情况下，cobimetinib和trametinib都不能刺激PS暴露，这表明MEK抑制剂既不能诱导促凝血小板形成，也不能引发血小板凋亡。在观察其他血小板功能反应时，我们发现联合CRP-XL(1μg/ml)和TRAP(10μM)刺激血小板后，cobimetinib抑制Annexin结合(logIC50=-5.1M±0.76)，但曲美替尼没有表现出抑制作用。　　

　　血小板在动脉剪切下形成稳定聚集体的能力对正常止血至关重要。因此我们调查的影响cobimetinib和trametinib动脉流条件下体外血栓形成试验使用全血。我们发现血小板积累在胶原蛋白涂层流室，正常化最大vehicle-treated应对弥补捐助者之间的差异，治疗后发生在类似的速度10μMcobimetinibtrametinib相比vehicle-treated控制。　　

　　血栓形成的形态学要么MEKinhibitor-treated全血出现相同vehicle-treated控制和定量non-normalised血小板沉积在胶原蛋白9分钟后没有明显不同vehicle-treated控制治疗后cobimetinib或trametinib(10μM)(p>0.05，1路的方差分析与配对和Dunnett多重比较检验)。详情请扫码咨询：