培美曲塞对奥希替尼/泰瑞沙耐药的影响

　　奥希替尼（泰瑞沙）联合培美曲塞或顺铂对PC9T790M细胞增殖和细胞死亡诱导的影响。一个PC9T790M细胞用50nM 奥希替尼处理，50nM的培美曲塞或所指示的调度的基础上500nM的顺铂。12天后，进行结晶紫测定，并在570nm处测量吸光度。结果代表三个独立实验。与奥希替尼相比p<0.05，p<0.01，p<0.001，p<0.0001;单向方差分析，然后进行Bonferroni的后检验。b根据指示的时间表，用药物处理PC9T790M细胞长达48小时。在治疗期结束时，通过在Hoechst 33342和碘化丙锭染色的细胞上的荧光显微镜分析定量细胞死亡。结果代表三个独立实验的平均值±标准差（SD）。与对照相比p<0.01p<0.001，p<0.001；相对于奥希替尼，方差的单向分析。

　　为了测试耐奥希替尼的细胞的化学敏感性，我们在存在浓度递增的奥希替尼（从10 nM至500 nM）的情况下培养PC9T790M细胞9个月后，产生了两个克隆（osi-R clA，clC）。剂量反应治疗曲线显示，奥希替尼的IC50高于5μM。两个克隆均在EGFR中维持外显子19缺失和T790M突变，但是C797S，MET或HER-2的扩增，表型转化均未被鉴定为抗性的潜在机制。NGS分析未发现任何获得性突变。拷贝数改变（CNA）分析表明，osi-R clC呈现NRAS的扩增。该改变也通过ddPCR CNA测定法得到证实。有趣的是，当奥希替尼与培美曲塞或顺铂联合使用时，未出现抗药性克隆。

　　耐药克隆对顺铂的敏感性与PC9T790M亲代细胞一样，但对培美曲塞的耐药性更高，正如我们先前报道的对吉非替尼耐药的PC9细胞一样。相对于亲代细胞，在clA和clC中TS基因表达显着增加。，提示该机制可能是耐药的原因，与已发表的文献表明TS过表达是NSCLC对培美曲塞治疗耐药的常见机制一致。但是，我们不能排除与奥希替尼耐药有关的其他机制也可能赋予对培美曲塞的耐药性。

　　为了进一步证实奥美替尼耐药细胞中的培美曲塞耐药性，我们建立了来自于奥美替尼组中出现的耐药肿瘤的两个细胞克隆。和预期的那样，两个细胞克隆均显示奥希替尼的IC50值大于5μM。因此，根据体外产生的抗性克隆获得的结果，源自抗性肿瘤的细胞对培美曲塞的耐药性也更高。如果您有需要购买奥希替尼仿制药，更多详情可咨询下方微信。