信号节点与细胞对DHA或对奥希替尼/泰瑞沙反应之间的相关性

　　为了进一步确认奥希替尼（泰瑞沙）加DHA组合在HNSCC细胞中的作用，进行了蛋白质印迹和定量实时PCR来确定基因在蛋白质和mRNA水平上的表达。如预期的那样，DHA单一疗法几乎以剂量依赖性方式完全消除了关键酪氨酸705（Tyr705）上的STAT3磷酸化。出乎意料的是，我们可以看到单独的DHA对其他与EGFR抑制剂抗性相关的激酶的磷酸化具有抑制作用。DHA抑制了跨膜蛋白含CUB域的蛋白1（CDCP1）和MET RTK的磷酸化。还可以看到DHA对AXL蛋白表达的某些影响，尤其是在CAL27细胞系中。类似于我们在EGFR突变阳性的NSCLC细胞，在和的FaDu HNSCC CAL27细胞系奥希替尼单独诱导STAT3，SRC，桩，YAP1，和FAK磷酸化。

　　DHA和DHA加奥希替尼的组合可逆转此现象。双重组合比单独使用每种药物都能更深刻地抑制CDCP1和MET磷酸化以及AXL表达。基因表达分析表明，与基线时和/或单独用奥希替尼治疗的FaDu和CAL27细胞相比，在治疗7天后，奥希替尼加DHA显着降低了AXL，CDCP1和MET mRNA表达水平。基于DHA降低HNSCC诱导谷胱甘肽过氧化物酶死亡的谷胱甘肽过氧化物酶（GPX4）水平的先验知识，我们在探索的转录物中添加了GPX4。如图所示，当奥希替尼与DHA联合使用时，它可以下调两种HNSCC细胞系中GPX4的表达水平，但差异无统计学意义。

　　单一治疗或奥希替尼加DHA组合对参与EGFR途径和RTK下游信号传导的蛋白质的影响。蛋白质印迹分析显示了用DHA（A）和奥希替尼加DHA（B）处理的FaDu和CAL27细胞中的蛋白质水平。在A中，用增加剂量的DHA处理细胞24小时。在B中，用单一药物（0.5 μM 奥希替尼和20 μM DHA）或组合药物处理细胞，并在处理后24 h提取蛋白质。B-肌动蛋白用作负载对照。至少从三个重复中生成数据。DHA，双氢青蒿素；EGFR，表皮生长因子受体；RTK，受体酪氨酸激酶。

　　奥希替尼和奥希替尼加DHA对AXL，MET，CDCP1和GPX4表达的影响。（A）FaDu和（B）CAL27细胞用0.5 μM的奥希替尼或0.5 μM的奥希替尼加20 μM的DHA处理三天，五天和七天。使用定量逆转录PCR检测AXL，MET，CDCP1和GPX4 mRNA表达。至少从三个重复中生成数据。β-肌动蛋白用于标准化基因表达。数据表示为平均值±标准偏差。用奥希替尼+ DHA处理的细胞系与基础条件下仅用奥希替尼处理的细胞系之间的统计学意义进行了评估。仿制药奥希替尼价格多少？更多详情可咨询下方微信。