乐伐替尼/仑伐替尼和瑞戈非尼片的耐药性

　　索拉非尼是用于晚期肝细胞癌（HCC）患者的一线药物。癌症患者获得性索拉非尼耐药性限制了其疗效。KEAP1被确定为最佳候选基因。在短期和长期的索拉非尼治疗中，KEAP1破坏的HCC细胞不如野生型细胞敏感。KEAP1的破坏抵消了由乐伐替尼引起的细胞活力的降低和ROS的升高，该药物最近已显示出作为不可切除HCC的一线治疗的临床疗效。Keap1破坏还增加了细胞对雷戈非尼的抗药性，雷戈非尼是最近被批准用于治疗HCC的二线治疗药物。我们的数据表明KEAP1失活后KEAP1/Nrf2通路的失控通过上调Nrf2下游基因和降低ROS水平而促进人HCC细胞中的索拉非尼，乐伐替尼（仑伐替尼）和瑞戈非尼片耐药性。原发性肝癌是最常见的类型，并且是癌症死亡的第二常见原因。

　　与野生型细胞相比，KEAP1破坏的细胞显示出较低的基础和索拉非尼诱导的活性氧水平，并且对氧化应激诱导的细胞死亡更具抵抗力。 KEAP1的缺失会导致Nrf2的活性增加，Nrf2是控制抗氧化反应的关键转录因子，进一步证实了Nrf2调控的基因的表达增加，这些基因与化学抗性呈正相关。

　　晚期肝癌唯一可用的治疗方法是使用索拉非尼或自最近以来使用乐伐替尼的分子靶向治疗。这些药物主要作用于Raf-1等丝氨酸-苏氨酸激酶，以及血管内皮生长因子受体和血小板源性生长因子受体β等受体酪氨酸激酶，抑制血管生成，增殖和肿瘤生长。尽管与安慰剂相比，接受药物治疗的患者的中位总生存时间略长，但最终预后仍然令人沮丧。

　　HCC获得的对这些药物的抗药性可能是由于基因不稳定性和异质性导致分子和信号改变的原因。JAK/STAT途径的抑制和自噬的增加与索拉非尼耐药有关。但是，索拉非尼和乐伐替尼耐药的机制仍不完全清楚。他们的阐明可能有助于发现分子生物标志物，以预测对HCC治疗的敏感性，以及确定克服耐药性的新治疗策略。

　　CRISPR/Cas9基因组编辑技术已被有效地用于筛选与药物抗性有关的基因。大多数研究都集中在亲代癌细胞的初始药物反应上。在这里，我们建立了索拉非尼耐药细胞系，并进行了CRISPR/Cas9筛选，以鉴定调节获得性索拉非尼耐药性的潜在基因。该筛选将KEAP1鉴定为对索拉非尼的易感基因。我们最初的策略是使用索拉非尼耐药HCC细胞系来鉴定调节细胞对药物耐药性的基因。

　　SR HCC细胞系来源于PLC/PRF/5，HepG2/C3A和HUH-7细胞，这些细胞在三个月内暴露于5μM索拉非尼。尽管最初对在这三种细胞系中获得的药物产生抗药性，但PLC/PRF/5和HepG2/C3A细胞的抗药性表型并不稳定，并随时间流失。相反，HUH-7细胞对索拉非尼的耐药性是稳定的。因此，将这些称为HUH-7 SR的抗性细胞用于筛选。如果您有需要购买仿制药乐伐替尼，可咨询下方微信。