大剂量奥希替尼AZD9291的影响

　　我们探索了奥希替尼(AZD9291)存在下AKT和MAPK信号通路持续信号传导的潜在机制。为了排除药物水平不足的可能性，我们检查了大剂量奥希替尼(AZD9291)的影响。然而，增加奥希替尼(AZD9291)浓度并没有进一步抑制EGFR、AKT或ERK磷酸化，也没有消除96小时后的通路再激活。此外，PC-9/BRc1细胞的活力在100nM奥希替尼(AZD9291)时达到最大损失。这些数据表明AKT和MAPK信号的持续传递并不是由于EGFR抑制不足。　　

　　我们试图更好地描述暴露于奥希替尼(AZD9291)96小时后仍能存活的细胞群。为了评估奥希替尼(AZD9291)是否对剩余人群的细胞生长抑制作用较弱，我们使用PC-9/BRc1细胞，用100nM奥希替尼(AZD9291)或vehicle预处理96小时，生成浓度-反应曲线。我们发现DMSO预处理细胞与奥希替尼(AZD9291)预处理细胞的EC50无差异(3.46vs.3.44nM，p=0.96)。　　

　　同样，对奥希替尼(AZD9291)暴露96小时后的EGFR外显子19、20和21进行测序，在五种受测细胞系中均未发现EGFR激酶结构域内的任何新突变(数据未显示)。综上所述，这些数据表明，奥希替尼(AZD9291)治疗并不能快速选择具有初级奥希替尼(AZD9291)耐药性的克隆。　　

　　另外，为了探索潜在的“旁路”信号通路，我们使用受体酪氨酸激酶阵列分析了用奥希替尼(AZD9291)处理的PC-9/BRc1细胞的裂解物，发现药物处理后，人表皮生长因子受体3(HER3)的磷酸化水平增加。然而，HER3敲低对AKT或ERK磷酸化没有影响，表明在这些细胞模型中，在奥希替尼(AZD9291)处理后，HER3并没有作为一个“旁路”信号。　　

　　接下来，我们关注了Src家族激酶(SFKs)的潜在作用，因为SFKs是AKT和MAPK信号通路的上游调控因子(21)。有趣的是，免疫印迹分析显示，奥希替尼(AZD9291)处理后SFKs磷酸化水平升高。治疗PP2，选择性SFK抑制剂，或达沙替尼，一个目标SFKsmulti-kinase抑制剂，减毒SFK激活的奥希替尼(AZD9291)。　

　　值得注意的是，PP2或达沙替尼治疗也导致更深刻的抑制ERK的磷酸化而独自奥希替尼(AZD9291)，这表明活动SFKsMAPK通路的持续的表皮生长因子受体信号的缺失。此外，与奥希替尼(AZD9291)单药治疗相比，PP2或达沙替尼联合治疗PC-9/BRc1细胞增强了生长抑制效果。　　

　　另外两种具有抗sfk活性的临床相关TKIs联合使用奥希替尼(AZD9291)与bosutinib或沙拉卡替尼，与单独使用奥希替尼(AZD9291)相比，也可改善细胞生长抑制。详情请扫码咨询：