克唑替尼胶囊与化疗的协同作用

　　一个存在ALK像差相关因素与劣质生存患者的高风险神经母细胞瘤。ALK抑制剂克唑替尼胶囊的出现提供了新的治疗机会。但是，某些ALK突变会导致从头对克唑替尼产生抗药性，并且克唑替尼的I期临床试验显示，携带这些ALK突变的患者缺乏反应。因此，了解抗药性的机制并为临床确定规避策略至关重要。

　　检查了具有不同ALK状态的人神经母细胞瘤来源的细胞系，细胞系和患者来源的异种移植（PDX）模型对克唑替尼联合托泊替康和环磷酰胺（拓扑/环）的敏感性。评价了培养的细胞和异种移植物对这些药物对增殖，信号传导和细胞死亡的影响，并评估了协同作用。

　　结果：在神经母细胞瘤中，鼠类异种移植物具有最常见的ALK突变，包括与对克唑替尼耐药相关的突变（但对野生型ALK不起作用），克唑替尼联合topo / cyclo增强的肿瘤反应和小鼠无事件生存。在具有ALK畸变（突变或扩增）的成神经细胞瘤细胞系中，与单独使用克唑替尼或topo / cyclo相比，克唑替尼+ topo / cyclo表现出协同的细胞毒性和更高的caspase依赖性凋亡。

　　结论：将克唑替尼与通常用于治疗新诊断的高危神经母细胞瘤患者的化学治疗药物联合使用可恢复同时具有敏感ALK畸变和从头耐药ALK突变的临床前模型的敏感性。这些数据支持克唑替尼和常规化疗的临床测试，目的是将ALK抑制作用整合到ALK异常的神经母细胞瘤患者的多药治疗中。

　　在这里，我们报告了一种新的ALK抑制剂克唑替尼与常规化学疗法（拓扑替康加环磷酰胺）的新型治疗组合，具有明显的抗肿瘤活性，并且在对克唑替尼敏感和克唑替尼耐药的ALK模型中均显着延长了无事件生存时间-突变型神经母细胞瘤。我们还显示了体外证据这种组合在具有高水平ALK扩增的一种神经母细胞瘤细胞系中具有协同作用。虽然我们的数据表明ALK增生的肿瘤将对克唑替尼联合托泊替康和环磷酰胺起反应，但在代表这种罕见的ALK畸形神经母细胞瘤亚型的模型中需要进行其他非临床研究。

　　重要的是，在单独使用克唑替尼或化学疗法仅引起轻度或无活性的情况下，观察到联合使用具有协同作用。例如，具有抗性F1174L突变的异种移植物在停止治疗后的另外24周内显示出肿瘤的完全缓解。有趣的是，这种持续的抗肿瘤活性伴随着肿瘤抑制蛋白p53及其下游效应物p21，PUMA和裂解半胱氨酸蛋白酶3的上调。联合治疗可治疗ALK异常和p53功能性神经母细胞瘤模型。

　　该观察结果促使我们研究p53途径的激活是否可能是克唑替尼和遗传毒性剂联合使用时观察到的协同作用的决定因素。携带突变的TP53的神经母细胞瘤模型对联合治疗的反应缺乏，这提供了初步证据表明这种协同作用至少部分依赖于功能性p53途径。此外，在两个ALK中与基因消融的p53突变的成神经细胞瘤细胞相比，与相应的对照组相比，联合治疗后协同作用消失了。两者合计，我们在这里显示，p53途径的激活在介导克唑替尼和化学疗法在激活ALK的神经母细胞瘤模型中观察到的协同作用中起作用。

　　我们的发现得到最新研究的支持，这些研究表明ALK信号抑制与p53介导的细胞死亡重新激活之间存在相关性。另外，对应于ALK促凋亡结构域的合成肽在ALCL和成神经细胞瘤细胞中引起p53介导的细胞毒性（31）。在同一项研究中，ALK肽与蛋白质相互作用，而先前已报道该蛋白与p53基因和蛋白质相互作用。与我们的发现相似，p53敲低从ALK中拯救了ALCL和神经母细胞瘤细胞肽介导的细胞死亡。

　　还没有完全阐明ALK抑制如何影响p53途径并促进克唑替尼和化疗之间协同作用的确切机制。正在进行研究以确定ALK抑制剂介导的细胞死亡是否是由于ALK不仅在调节经典受体酪氨酸激酶途径而且在调节p53途径方面具有双重功能。这可以为靶向ALK和其他针对p53的特定疗法（例如MDM2抑制剂）的药物组合设计提供依据。我们观察到总ALK明显减少化疗和联合治疗的异种移植肿瘤的水平尚不清楚，但我们推测这可能是化疗后转录降低或ALK和p53之间潜在的反馈机制继发的，其中ALK作为p53的负调节剂而被降低通过p53的转录活性。

　　总而言之，我们证明了将克唑替尼与常规化学治疗剂联合使用在ALK驱动的成神经细胞瘤模型中有效，该模型显示出不同的克唑替尼敏感性，为目前正在开展的COG 1期临床试验提供了理论依据（NCT01606878）。在新诊断的神经母细胞瘤患者的高风险亚组中，有14％的患者将出现ALK畸变，且预后较差，这为临床研究将克唑替尼纳入这些患者现代化疗方案的骨干提供了独特的机会。微信扫描下方二维码了解更多：