奥希替尼耐药后第四代靶向药

　　奥希替尼耐药后第四代靶向药是什么？奥希替尼已被证明可以克服表皮生长因子受体（EGFR）-T790M，这是对第一代EGFR-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）相关的获得性耐药。但是，C797S突变会削弱EGFR 797位的半胱氨酸残基与奥希替尼之间的共价结合，从而诱导对奥希替尼的耐药性。目前，尚无有效的治疗策略来克服C797S / T790M /活化突变（三重突变）介导的EGFR-TKI耐药性。

　　在本研究中，我们确定布加替尼在体外和体内均可有效对抗三重突变的细胞。我们最初的计算模拟表明，布加替尼适合三突变EGFR的ATP结合口袋。结构与活性之间的关系分析揭示了布加替尼中抑制三突变EGFR的关键成分。由于降低了表面和总EGFR的表达，与抗EGFR抗体合用显着提高了布加替尼的疗效。因此，布加替尼与抗EGFR抗体的联合治疗是克服三突变EGFR的有力候选者。

　　奥希替尼的批准将影响EGFR突变型肺癌的治疗策略，但再次，对奥希替尼的耐药性将成为主要障碍。2015年，多个小组独立发表了获得性抗奥希替尼耐药性的各种机制。在来自奥希替尼难治性患者的无细胞血浆DNA中检测到涉及在797位半胱氨酸被丝氨酸取代的EGFR突变（C797S），并显示出诱导的奥希替尼耐药性。Ercan等报道，Ba / F3细胞用三个氨基酸取代，L844V，L718Q和C797S，使用发现Ñ乙基Ñ-亚硝基脲诱变方法完全对第三代EGFR-TKI WZ-4002，奥希替尼和CO-1686无效。在没有C797S突变的病例中，尽管据报道T790M的丢失是对第三代EGFR-TKIs的特异性耐药机制，但耐药肿瘤中旁路通路的激活（例如c-MET激活或小细胞肺癌（SCLC）转化）仍是思想是抗性的类似于已知的机构第一代EGFR-TKI的。确实，HER2扩增，Met扩增，BRAF突变和SCLC转化已经在耐奥希替尼患者中观察到。因此，需要新的治疗策略来克服对第三代EGFR-TKI的耐药性。

　　为了研究治疗三突变型EGFR患者的治疗策略，我们进行了药物筛选，根据体外和体内试验，布加替尼是抗三突变型EGFR的有前途的候选药物，对野生型EGFR的效力较小。结构-活性关系分析和计算仿真揭示了决定与三突变表皮生长因子的亲和力和结合方式的关键因素，这有望归因于未来的发展。最后，与抗EGFR抗体的结合显着降低了布加替尼的IC50并延长了携带三突变体EGFR异种移植的小鼠的存活期。这项研究中的这些发现可能有助于克服对第三代EGFR-TKI的获得性耐药。

　　为了评估布加替尼是否通过ATP竞争作用于EGFR，并比较其三突变EGFR和野生型EGFR之间的活性，使用ADP-Glo试剂盒进行了体外激酶测定。该测定法证明的激酶活性抑制曲线随三突变体和野生型EGFR中ATP浓度的变化而变化，表明布加替尼竞争性地影响EGFR激酶结构域的ATP结合位点。通过对10μMATP计算的IC50值证实了布加替尼对三突变EGFR的更高效力，对于三重L858R，其IC50值比野生型低约10倍。此外，与每种药物的IC50值相比，布加替尼对无EGFR突变的细胞株显示的抑制活性要低于阿法替尼和奥西替尼，尤其是在野生型EGFR扩增的A431细胞中。在KRAS突变的A549或H460细胞中，所有这些抑制剂均具有较高的IC50值。

　　我们发现布加替尼在集中的药物筛选方案中对三突变表皮生长因子有效，并在体内和体外试验中证实了其活性。活性取决于ATP竞争性方式，对野生型EGFR的影响较小。与抗EGFR抗体联合治疗在体外和体内均显示出比单药治疗更好的活性无毒。构效关系证明，布加替尼的功效超过了其类似物，确定了几个关键的基本结构和官能团，例如计算机模拟预测的氧化膦基团。该模拟不仅表明布加替尼以相容的方式与三突变EGFR ATP结合袋结合的构象，而且还表明了在将来的方向上通过部分取代开发出更有效抑制剂的潜力。尽管布加替尼单药治疗的疗效似乎并不完全令人满意，但与抗EGFR抗体联合使用可显着降低IC50通过诱导表面和总EGFR表达的降解来抵抗三突变EGFR，从而导致具有三突变EGFR的细胞发生肿瘤缩小，并显着延长了异种移植小鼠的生存期。微信扫描下方二维码了解更多：