ALK药物克唑替尼/赛可瑞耐药的机制详情

　　最近已证明，ALK基因融合拷贝数的增加是体外对克唑替尼耐药的机制。除了对ALK进行标准FISH分析外，我们还测量了克唑替尼（赛可瑞）治疗前后ALK基因重排的每个细胞的拷贝数。拷贝数增加定义为与治疗前标本相比，治疗后标本中每个细胞重排基因的平均值增加了两倍以上。两名患者表现出异常信号拷贝数明显增加，与ALK基因融合的CNG一致。这两名患者的CNG既是由于每个细胞的ALK重排的拷贝数较多，又是显示重排模式的细胞增多。

　　9号患者接受了两个单独的活检程序，每个活检均不同。在最初的分期扫描显示病情稳定后，第一次在克唑替尼上治疗61天后进行，考虑到在大多数克唑替尼治疗的ALK阳性患者中看到的反应，这被认为是不寻常的。该活组织检查表明通过FISH缺乏ALK基因重排。通过直接测序的进一步评估表明，存在编码L858R取代的EGFR外显子21突变，该突变在用于建立ALK诊断的初始经支气管活检中不存在。通过SNaPshot分析证实了此样本上的EGFR突变。有趣的是，在克唑替尼上113天后对进展中的肝脏病变进行的第二次活检确实显示了ALK基因重排，但没有证据表明SNapSHOT评估了ALK激酶结构域突变，EGFR突变或任何其他异常癌基因。为了确认所有样本确实来自同一患者，使用STR分析对原始诊断性活检样本和两个再活检样本进行了指纹识别，确认了样本的共同遗传起源。

　　值得注意的是，进行了克唑替尼后活检但无可评估材料的1号患者证明，克唑替尼活检前样品中还存在EGFR外显子20突变。通过FISH分析进行ALK基因重排。该患者接受厄洛替尼治疗超过9个月，然后才终止治疗并开始克唑替尼治疗。患者在疾病进展明显之前仅接受了克唑替尼的27天治疗。对再活检样品的测试显示了持续的ALK+FISH测试，但由于肿瘤样品的其余部分用于启动细胞系，因此未进行进一步的分子测试。与两种已知的EML4-ALK阳性NSCLC细胞系相比，对该细胞系的初步分析表明对克唑替尼具有明显的抗性。

　　对该细胞系的FISH分析后来证明没有ALK基因重排的证据，重复的RT-PCR分析未能显示EML4-ALK基因转录物的证据。细胞系的SNaPshot分析表明存在KRAS G12C突变，这已通过直接测序得到了证实。考虑到直到进展的持续时间很短，我们询问在克唑替尼前样品中是否可检测到这种突变。显微解剖的克唑替尼前活检的直接测序表明存在KRAS G12C突变.11号患者对治疗有部分反应，之后在肝脏中进展7个月时，当进行活检并证明ALK基因重排以及编码G12V替代的KRAS突变的持久性时。诊断活检的分析没有发现EGFR或KRAS突变的证据。在11号患者中，我们无法确定ALK基因重排和KRAS突变是否发生在相同或不同的肿瘤细胞中。

　　而对于10号患者，鉴于ALK阴性，则活检中可能同时存在两种异常的病变可能会产生KRAS阳性细胞系，这意味着ALK和KRAS阳性细胞必须作为分离的亚克隆存在。相同的肿瘤。为了进一步探讨KRAS突变的获取是否可以作为ALK阳性细胞中对克唑替尼耐药性的直接机制，我们询问了突变KRAS G12V的表达是否可以在EML4-ALK阳性细胞系中引起克唑替尼耐药性，通常对克唑替尼敏感。选择KRAS G12V是因为它是在患者中观察到的形式，在该形式中无法正式评估相同细胞中的共存。将突变的KRAS G12V或空载体导入H3122和细胞增殖。现在克唑替尼的效果也是非常不错，更多详情可咨询下方微信。