辣椒素和索拉非尼/甲苯磺酸索拉非尼片联合治疗可以抑制肝癌

　　目的:研究辣椒素和索拉非尼单独及联合应用对人肝癌细胞株lm3、hep3b和huh7的影响。随着辣椒素和索拉非尼浓度的增加，这四种细胞系的存活率和增殖率降低。低浓度的辣椒素和中等浓度的索拉非尼联合应用可以大大增强对细胞存活和增殖的抑制作用。

　　不同组合的辣椒素和索拉非尼对lm3细胞的增殖均有不同程度的抑制作用，在lm3细胞中，索拉非尼联合辣椒素(80、100和120m)的ic50分别由3.987m降至2.989m、2.590和1.854m，在80、100和120m时，索拉非尼与辣椒素有显著的协同作用。

　　选择80m辣椒素和4m索拉非尼的混合物进行下一系列实验。为了确定细胞凋亡的程度，采用原位末端标记染色法检测细胞。用辣椒素和索拉非尼处理后，镜检显示细胞染色，辣椒素和索拉非尼联合处理可见较高数量的原膜阳性细胞。为了进一步验证辣椒素和索拉非尼单独或联合应用诱导细胞凋亡的细胞凋亡，采用流式细胞仪分析方法进行细胞凋亡评价。联合治疗比单一治疗更能诱发细胞凋亡。如图3b所示，对照组、80m辣椒素、4m索拉非尼、80m辣椒素和4m索拉非尼联合治疗48h后凋亡细胞百分率分别为3.43±0.536、16.58±0.629、21.18±0.809和52.13±1.602%。

　　为了进一步阐明lm3细胞凋亡增加的机制，我们研究了两种关键的凋亡相关蛋白bcl2和bax的蛋白水平。联合应用辣椒素和索拉非尼可上调促凋亡蛋白bax的表达，降低抗凋亡蛋白bcl2的表达。免疫印迹法也检测了caspase-3。结果表明，80m辣椒素和4m索拉非尼作用24h后，caspase-3的裂解率增加。上述结果表明，辣椒素联合索拉非尼可调节lm3细胞凋亡信号通路的激活。

　　为了研究辣椒素和索拉非尼联合处理对细胞自噬的影响，采用免疫组织化学方法检测了自噬相关基因beclin-1、p62和lc3a/b-ii的蛋白表达情况。联合治疗组与单药治疗组相比，beclin-1和lc3a/b-ii水平升高。与单药治疗组相比，联合治疗组自噬特异性底物p62明显减少。

　　辣椒素和索拉非尼联合应用能显著抑制lm3细胞的侵袭和迁移细胞刮痕试验用于确定辣椒素和索拉非尼是否抑制肝癌细胞的迁移。如图5a所示，联合治疗后lm3无细胞区较单药治疗后宽，治疗组48、72h伤口较对照组宽，表明辣椒素和索拉非尼协同抑制lm3细胞迁移。移行试验和基质胶侵袭试验表明，辣椒素和索拉非尼均能抑制lm3细胞的迁移和侵袭，联合治疗效果优于单药治疗。因此，我们接下来检测e-cadherin，n-cadherin，vimentin，mmp2和mmp9在单一治疗组和联合治疗组的表达水平，通过西方墨点法。联合应用辣椒素和索拉非尼后，lm3细胞n-cadherin、vimentin、mmp2和mmp9水平明显降低，e-cadherin水平升高。

　　为了阐明辣椒素和索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）协同作用的机制，我们研究了与辣椒素和索拉非尼协同作用有关的pi3k/akt/mtor信号转导。辣椒素和索拉非尼联合治疗可降低细胞内pi3k、p-akt、p-mtor和p-p70s6k的水平，联合治疗后细胞内pi3k、p-akt、p-mtor和p-p70s6k的水平均低于单药治疗组。Pi3k/akt/mtor信号可被多种刺激激活。生长因子受体家族蛋白是pi3k/akt/mtor信号传导的主要上游分子。许多实体肿瘤表现为egfr高表达或异常表达。Egfr与肿瘤细胞增殖、血管生成、侵袭、转移和凋亡抑制有关。因此，用辣椒素、索拉非尼或它们的联合治疗后，检测了lm3细胞中p-egfr和egfr的水平。辣椒素和索拉非尼联合处理可使lm3细胞p-egfr和egfr水平降低，联合处理可协同降低p-egfr和egfr水平，与单一处理组相比有所下降。结果表明，辣椒素和索拉非尼协同抑制egfr和pi3k/akt/mtor信号转导。

　　辣椒素和索拉非尼协同抑制肝癌细胞的生长，进一步证实了辣椒素和索拉非尼协同抑制肿瘤生长的作用。辣椒素和索拉非尼治疗从接种后第7天开始，静脉注射28天。观察到辣椒素和索拉非尼联合治疗对肿瘤体积有明显的抑制作用。然而，对照组和治疗组的体重没有显著差异。

　　此外，我们还利用免疫组织化学方法检测了异种移植瘤组织中与增殖、凋亡、自噬、侵袭和转移相关的蛋白质的表达水平，并对这些蛋白质的表达水平进行了免疫组织化学分析。辣椒素、索拉非尼及其联合应用抑制异种移植瘤的增殖、侵袭和转移，激活细胞凋亡和自噬。Ki67和bax表明联合应用辣椒素和索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）治疗的肿瘤中凋亡细胞增多，增殖细胞明显减少。另外，联合治疗组肿瘤中p62蛋白表达水平最高。辣椒素和索拉非尼降低了mmp2和mmp9在肿瘤中的表达，联合治疗增强了这种效果。

　　此外，在异种移植瘤中评价p-egfr和p-akt水平，观察到辣椒素和索拉非尼联合应用最大程度地降低p-egfr和p-akt水平。监测肝肾生化功能，四组间差异无统计学意义。为了进一步评价治疗相关毒性，对照组和药物治疗组的肝脏和肾脏进行h&e染色，显微镜下比较肝脏和肾脏的组织学结构，辣椒素、索拉非尼及其联合治疗未见明显组织学改变。这些结果表明，辣椒素和索拉非尼联合治疗能有效抑制异种肝癌的生长、侵袭和转移，并具有良好的耐受性。索拉非尼多少钱一盒？可以买到仿制药吗？通过康安途可以买到印度Natco的药品，详情请扫码咨询：