奥拉帕尼/奥拉帕利对多种原代CC细胞系的临床前活性

　　虽然奥拉帕尼（奥拉帕利），rucaparib和niraparib目前已获得FDA批准用于卵巢癌，并且多项临床试验目前正在评估PARPi作为单一药物或联合治疗多种人类肿瘤的能力，但有关奥拉帕尼在CC患者中的作用的信息尚有限。因此，在这项研究中，我们在体外和体内彻底研究了奥拉帕尼对多种原代CC细胞系的临床前活性。

　　我们发现9个主要CC细胞系中的3个对olaparib暴露高度敏感，IC50值小于2μM。为了获得进一步洞察分子特性使得向奥拉帕尼治疗敏感这些CC细胞系，我们评估他们的突变谱（即，HRD），以及它们的PARP1表达水平，并通过PARylation发挥的潜在作用。使用ARIEL2研究的14％临界值（目前修正的16％临界值）将肿瘤归类为HRD，我们没有发现任何经过测试的CC细胞系能够证明HRD。重要的是，我们发现肿瘤中的PARylation水平而非PARP1表达与CC细胞系对奥拉帕尼的敏感性始终相关。

　　为了证明PARylation过表达与奥拉帕尼敏感性之间存在相关性，我们通过在代表性细胞系（即CVX5细胞系）中通过PARP1 siRNA转染下调了PARP1 mRNA，并分析了IC50与使用通用阴性对照siRNA转染的CVX5相比，其值更高。我们发现，用PARP1 siRNA转染的CVX5获得了对奥拉帕尼治疗的高耐药性（p = 0.0063），这证实了PARP活性（PAR）对于确定CC细胞系中奥拉帕尼的敏感性至关重要。这些结果与Michels等人的结果相似，后者还发现非小细胞肺癌细胞系中细胞PARylation水平与对PARP抑制剂敏感性之间存在正相关关系。

　　此外，在与我们的结果一致，其它基团表明在不存在功能性HR的，或PARP1敲除PARP2细胞对PARP抑制剂耐药。综上所述，这些数据与我们在CC中的发现相结合，强烈表明对PARP1蛋白活性（即PAR表达）水平的测定可能代表了一种生物标志物，有可能鉴定出最敏感的CC患者以PARPi治疗。因此，在将来的CC研究中可能需要测试PARP表达/活性与对PARP抑制剂的敏感性之间的可能联系。

　　为了更好地了解奥拉帕尼抑制CC细胞生长的功能机制，我们进行了细胞周期分析实验。我们发现奥拉帕尼以剂量依赖的方式始终抑制所有敏感细胞系中G2 / M期的细胞周期，最终阻止细胞通过G1期。相反，在抗奥拉帕尼的CC细胞系（即CVX8）的细胞周期中未发现可检测的变化。如先前在卵巢癌中所证实的，奥拉帕尼的这种作用可以通过PARP捕获机制来解释，PARP捕获机制可以通过这种作用来诱导细胞毒性PARP-DNA复合物的形成，从而阻止DNA复制。当我们调查暴露于olaparib的CC细胞系中细胞死亡的机制时，我们发现只有不到1％的总细胞显示出坏死，证实了奥拉帕尼触发并诱导对奥拉帕尼敏感的CC细胞系凋亡的结果。

　　为了进一步阐明奥拉帕尼对抗PARP的作用机理，我们分析了奥拉帕尼治疗期间代表细胞系（即CVX5）中PARP-1和PAR蛋白的表达。我们的免疫印迹实验清楚地证明了奥拉帕尼暴露的主要结果是PARP1的剂量依赖性增加，进一步支持了奥拉帕尼诱导的PARP捕获现象。与该解释一致，在任何CC细胞系中测试的任何条件下，PARP-1 mRNA水平均未增加。两者合计，我们的研究结果支持PARP-1在细胞中的浓度逐渐升高的奥拉帕尼作为CC中主要作用机制的蓄积这一观念。重要的是，当我们评估注射CVX5的异种移植动物体内奥拉帕尼的体内活性时，我们的结果证实了体外结果显示CVX5肿瘤生长显着受损，动物总体存活率显着提高（p = 0.008）。

　　总之，我们在CC原代细胞系的重要子集中证明了奥拉帕尼的体外和体内活性，并提示PAR表达可能代表了CC患者PARPi反应潜在预测的新生物标志物。将来有必要对PARPi单独使用或与其他靶向药物联合用于CC耐受标准治疗方式的患者进行研究。微信扫描下方二维码了解更多：