利普卓/奥拉帕尼使胆管癌细胞对辐射敏感

　　胆管癌（CCA）是一种高度恶性的肿瘤，仅对放疗有抵抗力。利普卓（奥拉帕尼）是一种强效的聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂，已显示使许多类型的肿瘤对放射治疗敏感。然而，奥拉帕尼单药治疗或放疗联合治疗对CCA的作用尚不清楚，我们的研究旨在探讨这一点。为了评估三种CCA细胞系（QBC939，HuH28和TFK-1）的放射增敏作用，进行了活力和克隆形成分析。吸收的辐射剂量为0 Gy，2 Gy，4 Gy和6 Gy。

　　奥拉帕尼的浓度为0 nmol / L，1 nmol / L，10 nmol / L，100 nmol / L，1000 nmol / L，2500 nmol / L，5000 nmol / L和10000 nmol / L。通过蛋白质印迹探索了奥拉帕尼放射增敏的机制。进行了免疫荧光染色和流式细胞术，以探讨DNA损伤和凋亡。奥拉帕尼增强了CCA细胞的放射敏感性，仅奥拉帕尼对没有BRCA突变的CCA细胞系几乎没有影响。通过生存力和克隆形成分析，放射敏感性的程度随着奥拉帕尼剂量的增加而增加体外。奥拉帕里布能够通过抑制PARP1，诱导DNA损伤和凋亡来增强放射作用。这些发现强调了奥拉帕尼在CCA细胞放射增敏中的作用。

　　我们的数据表明，不同细胞系之间的放射增敏作用不同。单独归一化辐射效应后的活力曲线随辐射剂量的不同而不同，并表明奥拉帕尼可增强放射敏感性。此外，随着每剂量放射剂量奥拉帕尼剂量的增加，细胞活力稳定下降。通常，放射增敏为1的奥拉帕尼浓度变得明显μ摩尔/升，特别是在4戈瑞，在每个细胞系。

　　对于不同剂量的奥拉帕尼，单独进行奥拉帕尼效应标准化后的生存力曲线有所不同，并表明辐射增强了奥拉帕尼的细胞毒性。此外，在每剂量的奥拉帕尼中，随着放射剂量的增加，生存能力迅速下降。这种结果是临床上有意义的，与奥拉帕尼的副作用，最大临床剂量不能高和1μ摩尔/升为宜。这表明奥拉帕尼在临床实践中可能适合用作放射增敏剂。

　　从上述的结果，我们表明，1μmol / L的奥拉帕尼是适当的放射增敏，所以这个剂量用于探索奥拉帕尼对克隆生存的影响。与我们之前的结果一致，每个细胞系的克隆形成存活率随着辐射的增加而下降。但是，奥拉帕尼治疗导致克隆形成存活率进一步降低。这些数据还表明，奥拉帕尼可以增强每种细胞系的放射增敏作用，并且这种作用取决于放射疗法的剂量。

　　到现在为止，我们只关注奥拉帕尼的放射增敏作用，而不管其自身的作用如何，因为结果是通过0 nmol / L 奥拉帕尼或0 Gy的对照样品的生存力标准化的。我们绘制了一个热图，将奥拉帕尼和辐射的综合影响考虑在内。由此可见，联合疗法的杀伤作用在TFK-1细胞系中最大，证实了我们先前的结果表明它对辐射更敏感。

　　在这项研究中，我们讨论了PARP抑制剂奥拉帕尼对CCA细胞生长及其放射敏感性的临床前作用。作为单药，奥拉帕尼对CCA细胞的生长几乎没有影响，这与我们对BRCA1 / 2突变的下一代阴性测序相一致。有趣的是，与放射线结合使用时，奥拉帕尼显示出显着的放射增敏作用，其程度取决于细胞系类型和奥拉帕尼剂量。

　　PARPs是一个奇妙的多功能酶家族，PARP1是最丰富的形式，其充当“分子缺口传感器”向SSB发出信号。它们在介导的基础切除修复中起着至关重要的作用，参与了SSB的修复。PARP1抑制剂奥拉帕尼阻断了这种修复作用，导致了SSB的积聚，这些未修复的SSB在细胞复制后会转化为细胞毒性双链断裂（DSB）。在正常情况下，这些DSB通过同源重组修复途径的潜在无错误机制修复，其关键成分是肿瘤抑制蛋白BRCA1和BRCA2。

　　否则，修复工作将转向其他更容易出错的诱变途径，例如单链退火（SSA）和非同源末端连接（NHEJ），这些途径通常伴随基因组不稳定，容易导致合成杀伤力和细胞死亡。因此，奥拉帕尼在具有BRCA突变的患者中显示出巨大的优势。不出所料，对于某些没有这些突变的细胞，奥拉帕尼作为单一药物几乎没有作用。我们的工作表明，单独的奥拉帕尼对没有BRCA1 / 2突变的CCA细胞系（TFK-1，QBC939，HuH28）几乎没有影响。

　　即使奥拉帕尼作为单剂对肿瘤的影响不大，而不BRCA突变，PARP抑制剂对肿瘤放射致敏的能力已被证实在许多体外和体内模型。通过抑制另一修复途径选择性地利用从在BRCA1或BRCA2基因突变的DNA修复缺陷的理论是在癌症治疗中的一大突破。对于癌细胞，不BRCA1或BRCA2基因突变，可以奥拉帕尼然而通过其他机制，已报告有放射增敏产生在体内和体外。电离辐射会诱发SSB，从而导致复制叉处形成DSB。PARP1是修复这些疾病的关键酶，因此PARP抑制剂（例如奥拉帕尼）从理论上讲可以增加放射线诱导的肿瘤细胞死亡。

　　我们的数据表明，奥拉帕尼通过抑制PARP1增强CCA细胞的放射敏感性。此外，我们还发现奥拉帕尼可以增强永生化的正常细胞系的体外放射敏感性（HL-7702），这表明奥拉帕尼可以在高生长条件下增强细胞的放射敏感性。与体内正常细胞相反，癌细胞通常特征在于异常的细胞周期检查点控制，有缺陷的DNA修复途径和加速的增殖率。已经表明，PARP抑制剂的放射增敏作用需要DNA复制，因此它们比正常组织更能迅速扩散肿瘤。微信扫描下方二维码了解更多：