ALK突变克唑替尼的耐药

　　间变性淋巴瘤激酶（ALK）与棘皮动物微管样（EML）蛋白或其他伴侣基因的致癌融合发生在3–6％的肺腺癌中。尽管荧光原位杂交（FISH）是检测产生新融合基因的ALK基因重排的金标准，但并非所有的ALKFISH阳性（+）患者都对ALK抑制剂疗法产生反应。我们在这里报告了对ALK突变药物克唑替尼治疗无反应的ALKFISH +患者源异种移植物（PDX）。

　　在切除的pT4N1M0肺腺癌患者的NOD / SCID小鼠中建立了PDX。使用5A4抗体，使用标准FISH裂解试验，RT-qPCR，RNA测序（RNAseq）和免疫组化（IHC）研究了ALK基因的状态。通过每日口服管饲用克唑替尼（50mg / kg）治疗PHLC-402。

　　结果：原发患者肿瘤和PDX中ALKFISH分析均为阳性，IHC对ALK蛋白表达均阴性。通过比较5'和3'ALK转录水平的RNAseq和RT-qPCR未检测到ALK融合产物。克唑替尼治疗在小鼠中生长的PHLC-402不会导致肿瘤反应。

　　结论：ALK FISH +肺癌对ALK抑制剂治疗有反应可能需要ALK蛋白表达。

　　尽管在FISH和IHC之间进行ALK检测的一致性很高，但并非所有FISH +患者都对克唑替尼有反应。此外，由于未知原因，20％的FISH +患者对ALK靶向疗法无反应。缺乏响应可能是由于FISH结果呈假阳性。一项研究表明，主要由孤立的3'ALK模式所掩盖的肿瘤可能更易与假阳性相关联，这是由下一代测序确定的。但是，在PHLC 402的情况下，即使检测到FISH分离的3'和5'ALK信号，我们也无法检测到任何ALK mRNA或蛋白质。关于假阳性的推测可能是融合了ALK的基因重排基因突变到无法转录的区域，断点出现在ALK基因外部或转录后机制删除了ALK mRNA产物。

　　FISH被视为诊断ALK重排肺癌的金标准，在美国用于诊断筛查，而许多其他国家/地区也将IHC用于ALK诊断筛查。FISH受低通量，相对较高的成本以及潜在的对分离信号的错误解释的限制，导致假阳性或阴性结果。IHC是用于ALK检测的另一种方法，并且易于扩展，具有成本效益和效率。虽然ALK IHC可使用多种抗体（ALK1，D5F3和5A4），并且仅可使用一种FDA批准的诊断性ALK IHC检测方法，但染色方案的严格优化和标准化可为ALK IHC提供近100％的敏感性和特异性ALK FISH阳性肺癌。

　　有研究表明，FISH和IHC的一致性接近100％。但是，在某些情况下，FISH结果与IHC结果不相关。报告显示，ALK FISH和IHC之间的不一致率在0.3％至2％之间，ALK FISH- / IHC +肺腺癌患者对克唑替尼的反应良好，但是ALK FISH + / IHC-肺癌患者的反应如何对克唑替尼治疗尚不清楚。

　　以前的报告显示，EML4-ALK融合阳性细胞系H2228和H3122在体外和体内对克唑替尼敏感。我们显示，尽管FDX对ALK重排呈阳性，但PDX 402对克唑替尼具有抗性。通过RNA-Seq，通过RT-PCR的ALK激酶结构域mRNA表达和通过IHC的ALK蛋白表达，可以确定缺乏应答。我们的结果表明，将IHC纳入肺腺癌ALK检测的优势。微信扫描下方二维码了解更多：