患者的t细胞代谢是否与索拉非尼/甲苯磺酸索拉非尼片反应相关

　　为了了解异基因免疫反应和索拉非尼之间是否存在功能协同作用，我们使用了依赖混合系-白血病-部分串联重复MLL(PTD/wt)和FLT3(ITD/wt)-突变的小鼠白血病模型。照射/异源hct后注入白血病细胞，异源hct后第2天注入供者来源t细胞，类似于患者应用的供者淋巴细胞灌注(DLI)。我们只在接受索拉非尼和t细胞的小鼠中观察到长期的白血病控制。索拉非尼单独使用时无保护作用。在小鼠淋巴细胞白血病(Ba/F3-ITD)模型中观察到类似的白血病对照模式和LUC+-/GFP+-白血病细胞的扩增。通过微阵列分析Ba/F3-ITD细胞，体外索拉非尼暴露后，白细胞介素-15(Il-15)mRNA表达上调，qPCR和流式细胞术证实了这一结果。IL-15的产生依赖于索拉非尼敏感性，表达抗索拉非尼flt3-itdf691l突变体的Ba/f3细胞中IL-15的表达没有增加。

　　接受t细胞和索拉非尼的小鼠血清中IL-15升高。白血病细胞减少时，索拉非尼诱导的血清IL-15消退。不同小鼠髓系白血病模型(FLT3-ITD转染BM、髓系WEHI-3BFLT3-ITD细胞系，一种依赖混合系-白血病-部分串联重复MLL(PTD/wt)和FLT3(ITD/wt)-突变的遗传性AML模型13)中，在FLT3-ITD抑制后，IL-15血清水平升高。索拉非尼对体外t细胞活化无影响(fig.1e-h)。白血病细胞表达IL-15受体(R)血清素(suppl.1i，j)，这是IL-15转表达的必要因素。

　　在flt3-itd驱动的白血病细胞中，IL-15基因缺陷使索拉非尼的有益作用失效，而受体的IL-15基因缺陷则没有。外源性IL-15可以挽救白血病细胞中IL-15的缺失(Fig.2b)，但由于移植物抗宿主病(GVHD)更严重，致死率增加(Fig.2a)，而在索拉非尼处理的小鼠中没有观察到这种情况(Fig.2c)。这些数据表明，白血病细胞在索拉非尼暴露时产生的IL-15水平低于驱动gvhd反应的阈值。

　　基于抗体的IL-15缺失或il-15r缺陷t细胞的转移导致索拉非尼治疗后白血病控制损失。索拉非尼/t细胞联合应用改善了三种人源性AML模型的生存，这些模型使用了人原发的AMLFLT3-ITD细胞、MV4-11(AMLFLT3-ITDcell系)或MOLM-13(AMLFLT3-ITDcell系)细胞。

　　与对照剂相比，在接受索拉非尼治疗的allo-HCT受体中，供体CD8+t细胞显示了更高的抗肿瘤细胞毒性marker15CD107a、IFN-小鼠血清和CD40L的表达。与载体相比，IL-15增加了体外CD8+CD107a+t细胞的频率。il-15r的激活导致stat5磷酸化，索拉非尼处理小鼠的CD8+t细胞中发现更高的phospho-stat5水平。CD8+t细胞移植物的缺失而nk细胞的缺失导致索拉非尼的保护作用丧失，表明CD8+t细胞介导了索拉非尼诱导的抗肿瘤作用。

　　为了了解索拉非尼治疗后是否会产生记忆免疫，我们下一步从接受Ba/f3-itd-白血病+t细胞+载体或Ba/f3-itd-白血病+t细胞+索拉非尼治疗的小鼠中分离出CD8+H-2Kb+t细胞。CD8+H-2Kb+t细胞从接受过Ba/f3-itd-白血病、t细胞和索拉非尼的同种异体hct受体中分离出来，但不同的细胞群来自于培养基或索拉非尼+il-15治疗的小鼠，可以长期控制次级Ba/f3-itd-白血病细胞。索拉非尼处理的受体供体t细胞表现出长寿的特征，包括高bcl-2表达和pd-1表达减少。

　　从索拉非尼治疗的Ba/f3-itt-白血病受体中分离出的t细胞没有控制第三方wehi-3b细胞，这反映了reco-免疫应答的靶点特异性。体外索拉非尼暴露后，在flt3-itt阴性的白血病细胞系中未见IL-15产生，而flt3-itt阴性的wehi-3b细胞不能诱导记忆免疫。

　　干扰素调节因子-7(IRF7)是IL-15转录的重要上游激活因子。激活转录因子-4(ATF4)可以抑制irf7的磷酸化和激活21，从而抑制IL-15的转录。在小鼠和人flt3-itd驱动的白血病细胞中，我们观察到索拉非尼暴露后Atf4mRNA和蛋白的降低(Fig.4a，b，suppl.4a-c)，但在索拉非尼耐药或flt3-itd阴性的白血病细胞中没有降低(Suppl.Fig.4d-f)。与ATF4负调控降低一致的是，在小鼠和人白血病细胞中，索拉非尼治疗后活性IRF7(pIRF7/tIRF7)的数量增加(fig.c4-e，suppl.4g)，而在索拉非尼耐药的白血病细胞中活性IRF7(pIRF7/tIRF7)没有增加(suppl.4h)。索拉非尼治疗后il-15产生增加、irf7激活、生存延长、外周血白血病细胞计数减少，atf4过表达则消失。

　　irf7敲低(supply.fig.4m)导致索拉非尼治疗后人amlflt3-itd细胞il-15产生水平降低，延长生存期损失(Fig.4h，i)。对人amlflt3-itt细胞的激酶组分析和随后的激酶抑制显示索拉非尼对IL-15的产生具有选择性。索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）结合物分析未发现其他与il-15生产直接相关的激酶。基于这些观察结果，我们提出了索拉非尼通过抑制在FLT3-ITD+AML中ATF4的负调控功能而增加IL-15的产生从而导致irf7激活的机制(Fig.4j)。

　　与索拉非尼相似，其他flt3抑制剂增加了IL-15的产量。与我们在小鼠白血病细胞中的研究结果一致，我们观察到体外索拉非尼暴露增加了人原发性FLT3-ITD+AML细胞的IL-15mRNA，但在FLT3-ITDnegativeAML细胞中没有增加。

　　此外，索拉非尼治疗后，FLT3-ITD+AML患者血清IL-15水平、白血病细胞BM中IL-15/pIRF7蛋白和IL-15mRNA水平均升高，随白血病负担减轻而下降。我们分别分析有反应者(索拉非尼/dli治疗后血液学完全缓解)和无反应者(无完全缓解)。无应答者中未见IL-15/pirf7升高，其他细胞因子未见升高。在DLI/索拉非尼应答者中发现IFN-血清水平升高和IFN-40，000+CD8+t细胞频率。此外，穿孔素+CD8+t细胞在DLI/索拉非尼应答者中增加，但在无应答者中没有增加。

　　人原发性FLT3-ITD+AML细胞的全基因组测序显示不同的体细胞突变频率和拷贝数变化，与响应者/非响应者组无关。在几个无反应者中检测到flt3抑制剂抗性突变(D839G-FLT3，D835Y-FLT322)，但在所有有反应者中均未检测到。注释所有的突变在给定距离在转录起始的Interferon-regulatory-factor(IRF)基因的chromatin-state单核细胞，我们发现减少的数量遗传突变为Tx(强大的转录)和TxW转录(弱)网站在IRF7的amlDLI/索拉非尼-non-responders相比DLI/索拉非尼-responders(Fig.6e)。索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）治疗后，只有应答者的IL-15mrna表达上调。

　　线粒体空闲呼吸能力(SRC)和糖酵解能力(GC)被认为与延长t细胞存活和增强对抗原挑战的反应能力有关。为了了解患者的t细胞代谢是否与索拉非尼反应相关，我们通过测量基线和线粒体适应度测试23时的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)来确定其CD8+t细胞的代谢谱。DLI/索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）应答者患者在索拉非尼治疗后GC和SRC均显著增强。相比之下，DLI/索拉非尼（甲苯磺酸索拉非尼片）-无反应者的代谢状况未见变化。索拉菲尼怎么购买？详情请扫码咨询：