奥希替尼是一种不可逆的EGFR抑制剂

　　奥希替尼的体外代谢:人与小鼠的异同

　　为了确定小鼠是否适合作为研究体内奥希替尼分布途径的模型系统，我们首先比较了该药物在小鼠和人肝微粒体部分的体外代谢。对HLM和野生型MLM培养的样品分析发现，每个物种中有两种去甲基化(指定DM-1和DM-2)和五种羟基化(指定OH-1到OH-5)代谢物。脱甲基-奥希替尼的分布在物种之间非常匹配。然而,羟化形式在不同的比率,和两个被传销中产生更大的数量。

　　手动fragmentography确认产生的七个代谢物传销问题产生的相同,这DM-1和DM-2之前报道临床意义AZ5104(M6)和AZ7550(M3)代谢产物。在以前的报道中，只有三个单羟基代谢物被鉴定出来。OH-4对应于M1，但之前鉴定的另外两种代谢产物——指定为M4和m7——的结构细节无法与我们的数据进行比较。

　　为了进一步阐明参与奥希替尼代谢的人细胞色素P450s，我们用一组重组P450酶进行了孵育。CYP3A4和CYP1A1在DM-1的生成中最活跃，表现出近似相同的活性。CYP3A4在DM-2的生成中起主要作用，CYP1A1和CYP2C8起次要作用。有趣的是，到目前为止，CYP1A1在形成OH-1、OH-3和OH-5代谢物方面的活性最高，而CYP1A2和较小程度的CYP3A4、CYP1A1和CYP2C8产生OH-2。CYP3A4在4-OH代谢物的生成中最为活跃。

　　为了确定哪些细胞色素P450在人肝脏中这些代谢物的产生中起主导作用，我们使用了来自15个供体的HLM，其特征是对单个P450亚型的底物的探测活性。DM-1的形成与CYP3A4的标记物6羟基睾酮的形成有很强的相关性，与重组蛋白的数据一致。这与CYP2A6活性也有很强的相关性，但我们认为这可能是人为的，因为HLM面板中的CYP3A4和CYP2A6探针活性存在相关性(未显示)。这种关系之前已经在一组单独的HLM样本中观察到。事实上，重组的CYP2A6并不产生这种代谢物。

　　值得注意的是，Dickinson和他的同事观察到重组CYP2A6与奥希替尼有一定的活性。在HLM面板中DM-2的形成与重组蛋白的数据不太一致，与CYP3A4活性的相关性明显弱于与CYP2A6、CYP2B6和CYP2C8的相关性。OH-1数据是一致的，在HLM面板中没有参考CYP1A1活性的情况下，CYP3A4是第二强相关(忽略CYP2A6)。OH-2的生成与CYP3A4和CYP2C8的活性有很好的相关性，与重组数据一致，但与预测的CYP1A2的相关性却不明显。其原因尚不清楚。与重组P450数据一致，OH-4的形成与CYP3A4活性的相关性最高。这一分析并没有清楚地确定参与形成OH-3和OH-5代谢物的酶。

　　除了重组蛋白和探针底物相关分析，我们还使用异位特异性抑制剂对合并HLM中涉及奥希替尼处置的P450s进行了进一步表征。与上述工作基本一致的是，CYP3A4抑制剂酮康唑强烈抑制DM-1、DM-2、OH-1、OH-2的生成。此外，与相关分析一致，抑制CYP1A2并没有改变OH-2的产生。由于有报道称CYP1A1在人肝脏中基本表达水平较低，因此我们没有尝试在HLM中抑制该酶。

　　为了进一步研究CYP3A4和CYP1A1在奥希替尼代谢中的作用，我们确定了这些酶在体外重组转化为DM-1、DM-2和OH-1的表观动力学参数。以上数据均符合:(i)CYP1A1和CYP3A4均生成DM-1，其中CYP1A1KM远低于CYP3A4，而CYP3A4Vmax较高；(ii)CYP1A1在DM-2的形成中基本无活性，而CYP3A4表现出显著活性(iii)两种酶都产生OH-1，但CYP1A1KM较低，Vmax较高。

　　奥希替尼是一种不可逆的EGFR抑制剂，含有丙烯酰胺反应中心，在激酶活性位点与半胱氨酸797共价结合。通过在奥希替尼的嘧啶核与EGFR的蛋氨酸793之间形成两个氢键，增强了对这个靶点的特异性。不饱和酮部分是硫醇反应性的，这是转录因子核红血球2相关因子2(NRF2)的许多激活因子的共同特征。NRF2提供了对反应性亲电体的主要防御，并与癌症的耐药性相关。因此，我们测试了奥希替尼在三个稳定细胞系中激活nrf2驱动的荧光素酶报告的能力；其中两个驱动了内源性血红素加氧酶1(HO1)启动子A549_HO1和H1299_HO1,NRF2是调控因子之一；另一个驱动了一个合成启动子，包含8个抗氧化反应元件(ARE)，对NRF2特异(24)AREc32。在每个细胞系中，3mol/L奥希替尼处理24小时(经ATP细胞毒性测定72小时为无毒剂量，数据未显示)。奥希替尼多少钱一盒？一盒可以吃一个月吗？详情请扫码咨询：