CAR-T疗法的步骤介绍，第一步：T细胞收集、分离、活化，T细胞离开人体后需要合适的培养环境才能存活，因此，选择合适的培养基是开展CAR-T研究的开端。T细胞体外活化最常用的是CD3抗体和CD28抗体。CD3单克隆抗体（OKT3）能够特异性识别T细胞表面的CD3分子，通过T细胞表面TCR-CD3复合物与抗原提呈细胞表面MHC-II类分子-抗原肽的结合，导致T细胞活化、增殖。激动型CD28抗体对天然CD28受体的伴随刺激可以进一步促进T细胞的活化。第二步：筛选肿瘤相关靶点蛋白，肿瘤相关靶点可以说是CAR-T疗法的“灵魂”所在。不同的肿瘤会造成不同的基因突变，表达的蛋白也会不同。经过科学家不懈的努力，不断有新的肿瘤相关靶点被发现。
第三步：CAR-T细胞基因转导，CAR-T细胞基因转导常见的方法有慢病毒载体、逆转录病毒载体、转座子和mRNA电穿孔技术是较为常见转导方法。第四步：CAR-T细胞体外增殖培养，通过基因技术改造的CAR-T细胞需要在体外培养到一定的数量才能达到治疗要求，回输到患者体内。一般一个病人需要几十亿到上百亿个CAR-T细胞。CAR-T细胞的健康生长离不开相关细胞因子。细胞因子（CKs）是一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质（约 5 -20kDa），它们在细胞培养过程中发挥重要作用。
第五步：CAR-T细胞质量检测，CAR-T细胞回输到患者体内前需经过严格的放行检测。CAR-T细胞的质量检测主要包括生化检测、微生物检测和细胞学检测。生化检测主要用于 CAR-T的鉴别和纯度检测；细胞学检测主要是细胞计数、活率检测、体外效价检测（ELISA 检测试剂盒）等；微生物检测主要进行总厌氧菌计数、酵母和霉菌检测等。CAR-T细胞质量的优劣直接影响临床治疗效果和患者的健康，如不进行严格检测，甚至会危及患者的生命。
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