通用性CAR-T的研究中安全性问题是重中之重

　　安全性问题一直是CAR-T细胞治疗中的重中之重，2017年JUNO的CAR-T产品就因为出现两次病人死亡情况被FDA叫停，从而被Novartis和Kite超越。而对于通用型CART，其面临的安全性问题压力更大，UCART123被叫停，UCART19虽然还未出现与产品相关的严重副作用，但是临床试验中也出现了多名患者死亡。因此，通用型CAR-T的设计和优化，以及临床实验中出现的CRS等都应该被小心对待。

　　CRISPR/Cas9是现在应用最广泛，研究最深入的基因编辑工具。与TALENs和ZFNs相比，CRISRP/Cas9的精确性更高，能降低脱靶效应带来的副作用；设计简单，更利于规模化生产。虽然Novartis和Juno早在2015年就开始与CRISPR相关公司合作开发下一代CAR-T产品，但是现在还没有更多进展更新被报道。采用CRISPR/Cas9编辑T细胞基因组是相当困难的，CRISPR/Cas9的delievry方法主要包括慢病毒，腺病毒，AAV等病毒载体递送，使用质粒或者核糖核蛋白RNP电转，或者是使用编码Cas9的mRNA与sgRNA共电转。虽然使用质粒DNA核转能够编辑T细胞基因，但是DNA核转对于T细胞的毒性非常大，不利于T细胞编辑的大规模应用。

　　在通用性CAR-T的研究中为了达到敲除多个基因的目的，使用多个sgRNA共转T细胞可能会产生较高的细胞毒性；使用Cas9 RNP多元复合物会降低细胞毒性，但是会损失一定的编辑效率。有研究者开发了One-shot CRISPR system，将多个sgRNA组装进了CAR所在的慢病毒载体中，这样就只需要在Day3单独电转Cas9的mRNA就能够达到编辑的效果，从而减少多个共转造成的细胞毒性。此外，如何提高慢病毒或者AAV递送CRISPR/Cas9编辑T细胞的效率，也是降低通用型CAR-T生产成本，扩大生产规模的重要因素。

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