为了确定MAPK途径抑制如何影响BRAFV600E或V600K突变型黑色素瘤细胞中免疫调节基因/蛋白的表达水平，我们首先单独或与不存在和存在IFNγ一起用达拉非尼和曲美替尼（mekinist）治疗A375黑色素瘤细胞。INFγ能够诱导A375细胞中PD-L1和HLA-A的表达。达拉非尼和曲美替尼（单独或联合使用）可降低PD-L1并增加HLA-A，而与IFNγ暴露无关。有趣的是，达拉非尼，曲美替尼和达拉非尼+曲美替尼在体外对PD-L1的抑制作用是短暂的，并且未随时间跟踪该通路的激活状态。
在经过30天的时间过程中，用达拉非尼，曲美替尼或达拉非尼+曲美替尼处理的A375细胞中，PD-L1 mRNA水平在最初降低至第8天后一直稳定增长至第30天（补充图S3A）。与此相反，DUSP6 mRNA水平（一种可靠的MAPK激活替代物）在整个30天的时间过程中仍保持较低水平，这表明长期暴露于达布拉非尼的癌细胞中PD-L1表达与MAPK激活状态不相关，曲美替尼，或达拉非尼+曲美替尼。
此外，我们观察到许多BRAF抑制剂抗性克隆（12R5-1、12R5-3、16R6-3、16R5-5和16R6-4）是由亲本系A375发育而来，通过Western印迹分析，流式细胞仪和RT-PCR确定了高水平的PD-L1。在A375达拉非尼耐药的克隆中，PD-L1蛋白表达增加往往与pSTAT水平增加相关，这一结果与先前的报道一致。在所有测试的细胞样品中，IFNγ的表达均低于检测水平，添加IFNγ并不会进一步增加12R5-1耐药株中PD-L1的表达（数据未显示）。在12R5-1细胞系中，PD-L1表达仍然部分响应MAPK途径抑制，因为分别响应曲美替尼，达布拉非尼和达布拉非尼，PD-L1 mRNA水平分别降低了39％，34％和77％ +曲美替尼治疗。
我们还使用了NanoString定制代码集（302个基因）来测量基因的表达，包括A375和SK-MEL-24BRAFV600E中的肿瘤抗原，HLA分子以及与免疫调节，凋亡和MAPK信号传导相关的标志物–突变细胞。所示和补充表S4A对于A375细胞，MAPK抑制达拉非尼和曲美替尼上调肿瘤抗原NY-ESO-1，BAGE，TRP1，GP100，HLA-I类和II类分子，免疫调节因子如CD40，ICOSLG，IL15，IRF1，OX40L，SPP1，STAT1 / 3，TOX，B7-H3，PDCD2和促凋亡/肿瘤抑制基因，包括BCL2L11（BIM1），DPP4，PIK3IP1，RARRES3和TP53IP，并下调免疫抑制因子的子集，例如PD-L1，VEGFA，IL1A和NT5E（CD73）。
在SK-MEL-24电池中观察到了相似的结果。此外，通过RT-PCR和/或在A375和SK-MEL-24中证实了PD-L1的下调以及HLA-1和II分子的上调，并在12R5-1中观察到，但在YUSIT BRAF V600K突变细胞中未观察到。或流式细胞仪分析。此外，在这四个试验品系中，通过NanoString（而不是通过Taqman）测量的A375细胞中的肿瘤抗原NY-ESO-1 mRNA增加了约2倍，并且通过蛋白质印迹分析在蛋白质水平上增加了约2倍。而在YUSIT的mRNA水平（约6倍）和SK-MEL-24细胞的mRNA（37-93倍）和蛋白质水平均观察到MAPK抑制引起的MART1上调。现在曲美替尼价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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