达拉非尼Dabrafenib对BRAF突变型ERK信号转导的抑制作用

　　在临床上可用的RAF抑制剂中，主要靶点是V600E BRAF的达拉非尼（Dabrafenib）在无细胞试验中显示出对CRAF的最高亲和力。达拉非尼抑制CRAF的IC 50是〜10倍小于威罗菲尼。达拉非尼在接受治疗的患者中的平均最大血浆浓度在1.5μM和2.8μM之间。为了研究达拉非尼对不同BRAF突变诱导的ERK信号转导的影响，我们单独瞬时表达了13个BRAF突变体或使用CRAF在HEK293T细胞中；然后我们评估了达拉非尼治疗（2.5μM）2小时后的ERK激活状态。

　　我们在HEK293T和BEAS-2B模型中测试的非V600 BRAF突变都聚集在P环（ATP结合口袋）或DFG基序中。 BRAF激酶结构域。不幸的是，没有可用的BRAF突变NSCLC细胞系在DFG基序内具有突变。因此，我们分析了沿BRAF激酶结构域的P环具有两个不同突变的两个NSCLC腺癌细胞系，以及位于DFG基序内的具有BRAF突变的腺癌起源的CRC细胞系。如预期的那样，达拉非尼治疗HEK293T细胞单独表达具有升高的激酶活性的BRAF突变体导致p-ERK1 / 2水平降低。

　　达拉非尼治疗与CRAF共表达BRAF突变体（导致激酶活性升高和受损）的HEK293T细胞导致p-ERK1 / 2水平降低。唯一的例外是BRAF激酶突变体D594V受损，在达拉非尼治疗后显示p-ERK水平升高。在达拉非尼处理单用CRAF转染或与CRAF和wt-BRAF共转染的HEK293T细胞后，观察到p-ERK水平有类似的增加。达拉非尼对G469S BRAF表达细胞的ERK抑制作用微弱。

　　RAF抑制剂的两个类可以在丝氨酸338（S338），CRAF蛋白[的调节磷酸化位点诱导CRAF的磷酸化。我们观察到，无论BRAF分子的存在与类型如何，达拉非尼对所有HEK293T转染子的处理都会导致S338处转染的CRAF分子发生磷酸化。现在达拉非尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。