曲美替尼Trametinib与维莫非尼联合治疗的效果

　　曲美替尼与维莫非尼联合治疗的效果。MEK抑制剂和BRAF抑制剂联合治疗对BRAF- v600突变的晚期黑色素瘤有效，但对于BRAF突变的NSCLC， MEK抑制剂或类似联合治疗的效果尚未研究。我们分析了在vemurafenib中加入曲美替尼是否会在BRAF突变细胞H1755和HCC364中显示出任何疗效。　

　　在两种细胞系中，与vemurafenib相比，曲美替尼在7天后抑制生长更有效，但两种药物联合使用与单用曲美替尼没有显著差异。我们评估了DMSO、vemurafenib、trametinib及联合用药24小时后BRAF突变型NSCLC细胞周期的差异。与DMSO治疗相比，vemurafenib和曲美替尼均能有效地引起G1期阻滞，G1期细胞显著增加，S期细胞显著减少。　　

　　然而，联合用药并不比单独用药更有效。流式细胞术观察到的细胞周期阻滞在HCC364细胞中，用相应药物处理24小时后，用免疫印迹法检测细胞周期蛋白，证实细胞周期阻滞。与DMSO相比，vemurfenib、trametinib及联合用药CDK2下调，p21和p27上调。然而，在曲美替尼、vemurafenib或曲美替尼联合vemurafenib处理的细胞中，CDK2、p21或p27在这些细胞中的表达没有明显差异。　　

　　此外，我们没有观察到pJAK2和pSTAT3的表达差异。有趣的是，H1755细胞在CDK2或p21和p27中并没有表现出类似的趋势，尽管通过流式细胞术可以看到G1期阻滞和S期减少。这让我们相信，在这些细胞中，G1的阻滞与CDK2的下调无关，还有另一种机制。　　

　　我们进一步探讨了vemurafenib和曲美替尼联合用药对BRAF突变的NSCLC细胞凋亡的影响。曲美替尼诱导两种BRAF突变细胞系的凋亡。在HCC364和H1755中，vemurafenib和trametinib联合使用导致的凋亡率明显高于单一药物。不同剂量的曲美替尼处理后，HCC364细胞中PARP的切割证实了细胞凋亡，而在没有PARP切割的H1755细胞中，PARP的减少可见。曲美替尼处理后，HCC364和H1755细胞中促凋亡蛋白BIM的上调进一步支持了细胞凋亡的发生。与单独使用曲美替尼相比，组合使用会使BIM增加更多。这一观察结果表明，在BRAF突变细胞中，vemurafenib联合曲美替尼比单用曲美替尼更能促进细胞凋亡。BCL-2、BCL-xl、MCL-1、BAX、BAK表达无明显变化。　　

　　曲美替尼作为单一药物治疗BRAF突变NSCLC。MEK抑制剂selumetanib已被证明在KRAS突变的NSCLC的临床前肺模型中下调ERK信号，但在BRAF突变的NSCLC[25]中未显示类似的效果。我们希望在BRAF突变的NSCLC中比较引入BRAF抑制剂、MEK抑制剂或两者联合所导致的致癌信号改变。采用免疫印迹法评估肿瘤信号的变化，以评估vemurafenib vs.曲美替尼vs.联合用药在48小时内的细胞凋亡信号的变化，分别使用1μM剂量的单一药物和1:1的联合用药比例，1:1μM剂量。我们观察到，在HCC364和H1755细胞中，与DMSO或vemurafenib单独治疗相比，曲美替尼治疗显著抑制了ERK磷酸化。曲美替尼联合vemurafenib并不优于单用曲美替尼。　　

　　此外，我们注意到，无论是使用单一药物还是联合药物，pAKT在HCC364细胞中都没有升高(在HCC364细胞中隐约检测到p-AKT，其表达没有改变，免疫印迹未显示)。然而，我们看到了一个增加p-AKT表达式使用单一代理trametinib non-V600E BRAF突变H1755细胞和有趣的是trametinib和vemurafenib没有显示增加p-AKT DMSO溶液相比，表明或许p-AKT通路发挥作用与单剂trametinib抵抗治疗。曲美替尼对HCC364和H1755细胞也有诱导凋亡的作用。此外，曲美替尼Trametinib还可使两种BRAF突变细胞的G1期阻滞。虽然细胞周期蛋白的变化，CDK2的下调和p21、p27表达的上调仅在HCC364细胞中可见。详情请扫码咨询：