达拉非尼(Tafinlar)敏感性细胞

　　在这里，我们调查了PTTG1的参与黑色素瘤细胞增殖，侵袭性和对BRAF抑制剂（BRAFi）达拉非尼（Tafinlar）的反应。我们还初步评估了循环PTTG1蛋白监测黑色素瘤患者对BRAFi或达拉非尼加曲美替尼的反应的潜在价值。达拉非尼耐药细胞系（A375R和SK-Mel28R）比对药物敏感的细胞系（A375和SK-Mel28）更具侵袭性，但表达的PTTG1水平相当。达拉非尼消除了PTTG1的表达，并破坏了A375和SK-Mel28细胞中细胞外基质（ECM）的侵袭。相反，它既不影响A375R和SK-Mel28R细胞中PTTG1的表达，也不影响后者细胞中的ECM侵袭，同时进一步刺激了A375R细胞的侵袭性。评估对照组和PTTG1中的增殖和ECM侵袭沉默或不暴露于达拉非尼的A375和SK-Mel28细胞，证明该药物的抑制作用至少部分取决于其下调PTTG1表达的能力。PTTG1沉默也会损害A375R和SK-Mel28R细胞的增殖和侵袭性，并抵消达拉非尼诱导的A375R细胞中ECM侵袭的刺激。在A375R细胞中进行的进一步实验表明PTTG1CDK4 / 6抑制剂LEE011也可通过抑制MMP-9沉默而使细胞侵袭性受损，并且PTTG1表达和ECM侵袭也可以降低。因此，以PTTG1为靶点可能代表一种有用的策略，可削弱对BRAFi耐药的黑色素瘤的增殖和转移。循环PTTG1作为监测患者对靶向治疗反应的生物标志物似乎也值得进一步研究。

　　我们的结果表明，在达拉非尼敏感细胞系A375和SK-Mel28中，PTTG1沉默显着抑制了ECM的侵袭。此外，siPTTG1转染六天后，两种细胞系的增殖都大大降低。PTTG1沉默三天后，在A375中明显抑制了细胞生长，但在SK-Mel28细胞中没有，这很可能是因为与SK-Mel28细胞相比，A375细胞的增殖速率更高。值得注意的是，PTTG1在A375细胞中的过表达促进了侵袭性，但没有增殖，这表明与正常黑素细胞相比，这些细胞中PTTG1的基础水平明显上调，已经足以最大程度地支持细胞生长。

　　在对药物敏感的细胞系中，达拉非尼治疗消除了PTTG1的表达，这种分子事件似乎有助于药物对细胞侵袭ECM的能力产生抑制作用。实际上，如上所述，仅PTTG1沉默就能损害A375和SK-Mel28细胞的侵袭性。而且，在两种细胞系中，达巴非尼诱导的ECM侵袭抑制均不受PTTG1沉默的影响，这是预期的能够自行抑制PTTG1表达的药物。值得注意的是，PTTG1导致的ECM入侵受损击倒低于达拉非尼产生的击倒，表明除PTTG1表达外，该药物还抑制了涉及黑素瘤细胞侵袭性的其他途径。因此，达布拉非尼仍显着降低了过表达PTTG1的A375细胞的侵袭能力，尽管其显着高于经达拉非尼处理的对照细胞所显示的侵袭能力。

　　PTTG1表达水平对达拉非尼生长抑制作用的影响似乎更依赖于细胞背景，因为在A375细胞中，PTTG1沉默和PTTG1过表达均不会改变对达拉非尼的敏感性，而PTTG1敲低会增加SK的药物敏感性-Mel28细胞，如暴露于达拉非尼5天后进行的MTT分析所证明。然而，仍需确定A375和SK-Mel28细胞这种不同行为的分子机制。与发现协议，通过p53活化几个抗肿瘤剂负调节PTTG1表达，我们以前证明CDK抑制剂PHA-848125在赋予野生型p53的黑色素瘤细胞中显着损害PTTG1的表达和增殖，而在p53突变的细胞中，该药物基本上不影响该蛋白的水平，并抑制了其增殖。

　　因此，PTTG1沉默仅在p53突变的细胞中增加了PHA-848125的敏感性，因为这些细胞在单独暴露于PHA-848125后无法经历p53介导的PTTG1还原。A375细胞是p53野生型，而SK-Mel28细胞表达p53的突变形式。但是，在A375细胞和SK-Mel28细胞中，达布拉非尼同样会损害PTTG1的表达。因此，A375和SK-Mel28细胞的不同p53状态不能解释为什么siPTTG1仅在SK-Mel28细胞中增加达拉非尼（Tafinlar）的敏感性。在另一方面，PTTG1与众多蛋白质相互作用，并且作为转录因子，它可以直接或间接调节数百参与细胞周期，细胞凋亡，代谢和信号转导基因的表达。可以推测，在siPTTG1转染后，A375细胞与SK-Mel28细胞之间PTTG1靶标的表达/突变状态的差异可能是其对达拉非尼的不同反应的原因。

　　先前在不同于黑色素瘤的细胞模型中进行的研究指出，PTTG1的表达可以通过多种机制进行调节。实际上，的转录PTTG1发现基因通过转录因子SP1，NF-Y，OCT-1和T细胞因子4，被直接激活，并且如上所述，被p53抑制。PTTG1表达的正向调节还证实了几种生长因子，包括表皮生长因子，肝细胞生长因子，成纤维细胞生长因子-2，胰岛素样生长因子-1，它们已知可激活促分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇3-激酶的信号传导途径。

　　最近，一些微小RNA也出现作为负调节PTTG1表达式。有趣的是，埃尔南德斯等证明了狄古洛尔至少部分地通过抑制Hsp90和由此导致的RAS / RAF / MEK / ERK信号传导通路的损伤而下调了HCT116结肠癌细胞中PTTG1的表达。尽管需要进一步的研究来确定达拉非尼（Tafinlar）诱导的PTTG1表达抑制的潜在机制，但合理的假设是，药物诱导的BRAF / MEK / ERK信号级联反应的损伤促成了这一分子事件。微信扫描下方二维码了解更多：